[发明专利]一种猪圆环病毒2型毒株的灭活方法及猪圆环病毒疫苗

说明书

本发明公开了一种猪圆环病毒2型的灭活方法，它是用二乙烯亚胺(BEI)和甲醛联合灭活猪圆环病毒2型毒株抗原液。本发明猪圆环病毒2型毒株的灭活方法，稳定性好、成本低、灭活周期短，易于大生产应用。用本发明灭活的猪圆环病毒2型毒株制备的疫苗，免疫应激少、免疫效果好，适宜市场推广使用。

技术领域

本发明具体涉及一种猪圆环病毒2型毒株的灭活方法及猪圆环病毒疫苗。

背景技术

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型引起的猪的一种传染病，引起仔猪断奶综合征、猪皮炎与肾病综合征及母猪繁殖障碍，其临床表现多样化。猪感染圆环病毒后，可引起严重的免疫抑制，从而继发或并发其他传染病，如猪肺炎支原体、猪繁殖与呼吸综合征等疾病。

甲醛对病毒核酸和病毒蛋白质都有破坏作用,但首先是使病毒核酸灭活,即与含氨基的核苷酸碱基(如A、G、U)结合而使病毒核酸变性。甲醛较高浓度和较长时间的作用，可与病毒蛋白质的胺基结合而形成羟甲基衍生物或二羟甲基衍生物，后者再与酰胺发生交联反应。病毒蛋白质因而变性,阻止病毒核酸的逸出从而达到灭活的目的。二乙烯亚胺(BEI)作为一种烷化剂，灭活机制是生物DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤,引起单链断裂、双螺旋链交联及干扰酶系统和核蛋白作用，从而破坏核酸代谢、合成，导致病毒核酸芯子破坏而达到灭活目的。相比于甲醛灭活，BEI可以破坏病毒核酸但不改变病毒蛋白质。

目前市场销售猪圆环病毒2型疫苗大多采用甲醛灭活，少数采用BEI灭活，采用甲醛作为灭活剂，工艺成熟，价格低廉，一般需要在37～39℃处理72h左右，使用浓度一般为3‰，配苗免疫易引起免疫应激。目前也有文献报道采用价格更昂贵BEI作为灭活剂进行灭活，使用浓度一般为5mmol/L，通常在37℃处理24～72小时，在BEI浓度太低的情况下，难以保证灭活效果，且工艺不稳定。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种猪圆环病毒2型毒株的灭活方法，它是用二乙烯亚胺和甲醛联合灭活猪圆环病毒2型毒株抗原液。

进一步地，所述二乙烯亚胺在猪圆环病毒2型毒株抗原液中的浓度为1～4mmol/L，优选2mmol/L。

进一步地，所述甲醛在猪圆环病毒2型抗原液中的浓度为0.5‰～1‰，ml/ml，优选浓度为0.8‰，ml/ml。

进一步地，所述灭活是在温度30～40℃，转速80～200rpm/min的条件下灭活24～72小时。

更进一步地，所述灭活是在温度37℃，转速120rpm/min的条件下灭活24小时。

更进一步地，所述灭活后添加硫代硫酸钠终止灭活。

更进一步地，所述硫代硫酸钠在猪圆环病毒2型毒株抗原液中的浓度为1～4mmol/L，优选2mmol/L。

本发明还提供了一种猪圆环病毒灭活疫苗，它是由如下原辅料制备而成：

前述制备的灭活猪圆环病毒2型毒株抗原液90～100份，吐温-80 1～5份，白油180～200份，司本-80 4～16份，硬脂酸铝2～6份。

进一步地，它是由如下原辅料制备而成：

前述制备的灭活猪圆环病毒2型毒株抗原液96份，吐温-80 4份，白油188份，司本-80 12份，硬脂酸铝4份。

本发明最后提供了一种前述猪圆环病毒灭活疫苗的制备方法，它包括如下步骤

1)油相制备：取白油和司本-80混合，加硬脂酸铝加热搅拌至透明；

2)水相制备：取吐温-80，灭菌，冷却后加灭活猪圆环病毒2型毒株抗原液，振荡至吐温-80溶解；

3)乳化：取油相搅拌10～20min，再加入水相搅拌30～60min，即得猪圆环病毒灭活疫苗。