[发明专利]一种玉米与小麦远缘杂交产生小麦双单倍体的方法

权利要求书

1.一种玉米与小麦远缘杂交产生小麦双单倍体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步：在黄淮海南部夏玉米主产区，玉米材料分7期种植，分别于4月28~30日、5月6~8日、5月13~15日、5月20~22日、5月27~29日、6月3~5日、6月10~12日进行播种，期间做好水肥管理和病虫害防治，提高玉米花粉活力，使其与小麦花期相遇；

小麦材料分7期种植，分别于4月22~24日、4月28~30日、5月6~8日、5月13~15日、5月20~22日、5月27~29日、6月3~5日进行播种，其中小麦材料的种植条件为：温度22~26℃、湿度60~80%、3000~5000Lux、12h光照/12h黑暗的培养箱中培养，促进其出苗；

第二步：待小麦生长至分蘖期时，转入14~16℃、湿度40~60%、3000~5000Lux的培养箱中培养，促进其分蘖；小麦生长至拔节期时，转入20~22℃、湿度50~70%、4000~6000Lux、16h光照/8h黑暗的气候室培养，期间根据需要补水及防治病虫害；

第三步：小麦在散粉前1~2天经人工去雄、整穗后，套白色纸袋，待小麦柱头张开，取玉米花粉过滤留粉后，摇粉至小麦麦穗上，套袋隔离；摇粉至小麦麦穗上的为多个玉米品种的混合花粉；

第四步：将去雄授以玉米花粉后的小麦，分别在24h、48h用浓度为80~120mg/L的2,4-D处理2次，后经幼胚拯救、壮苗、染色体加倍，获得小麦双单倍体植株；

幼胚拯救的方法为：授粉后14~16d，剥取小麦颖果，在超净工作台上，先用70%乙醇表面灭菌30s，再用0.1%升汞灭菌10min，经无菌水充分冲洗3~4次后，于解剖镜下剥出幼胚，接种于1/2MS培养基，接种后先在4℃冰箱中处理2~3d，后置于室温黑暗条件下3d，最后在20~25℃、16h光照/8h黑暗条件下培养，使小麦幼胚发芽成苗；

壮苗的方法为:当幼苗生长至3~5cm时，转入壮苗培养基中，在温度11~15℃，16h光照/8h黑暗条件下培养2周，使植株生长健壮，其中壮苗培养基为1/2MS＋多效唑0.5mg/L＋IAA0.2mg/L；

染色体加倍的方法为：当幼苗发育至2~3个分蘖时，将小麦幼苗移出并修剪根部，用0.1~0.2%秋水仙素和DMSO溶液，在室温、黑暗、通气条件下处理5h，后用自来水冲洗3-4h；

第五步：将小麦双单倍体移至栽培盆中，在18~22℃、湿度50~70%、4000~6000Lux、12h光照/12h黑暗的人工气候室内继续培养至成熟，即得纯合、稳定的小麦双单倍体种子。

2.根据权利要求1所述的玉米与小麦远缘杂交产生小麦双单倍体的方法，其特征在于，4月中旬对玉米实验田施有机生态肥，对土壤进行改良并耙平、开沟。

3.根据权利要求1所述的玉米与小麦远缘杂交产生小麦双单倍体的方法，其特征在于，玉米材料播种时的行距为0.667米、株距为0.3米、种植密度为3300株/亩。

4.根据权利要求1所述的玉米与小麦远缘杂交产生小麦双单倍体的方法，其特征在于，小麦种植前一周对人工气候室进行紫外消毒和臭氧处理。

5.根据权利要求1所述的玉米与小麦远缘杂交产生小麦双单倍体的方法，其特征在于，第一步和第五步中，小麦的培养土包括按照质量比6:1:1的比例混合而成的大汉黑泥炭土、蛭石和珍珠岩，且每立方中加入150g含量为15-9-12＋2MgO＋TE的缓释肥。