[发明专利]一种单克隆抗体及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及CD24单克隆抗体及其应用。本发明公开了一种具有中和人白细胞分化抗原CD24生物活性的单克隆抗体以及该单克隆抗体的序列。本发明的CD24单克隆抗体可与CD24特异性结合，可以用于治疗与CD24表达过量、异常、失控相关的疾病，或用于ELISA、Western blot、流式细胞等生物学检测。本发明同时提供了一种带有工程化半胱氨酸的CD24单克隆抗体，可以用于制备均一的抗体偶联物。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及CD24单克隆抗体及其应用。

背景技术

人白细胞分化抗原CD24(clusterofdifferentiation24)是一种近年来受到重点研究的肿瘤标志物。当前研究表明，CD24分子是表观分子量介于30～70kDa之间的高度糖基化唾液酸糖蛋白。CD24包含33个氨基酸残基组成的核心蛋白骨架结构，具有16个潜在的O-或N-糖基化位点，与小鼠热稳定抗原高度同源；其成熟多肽能够通过羧基端的磷脂酰肌醇(glycosyl-phosphatidyl-inositol，GPI)锚定在细胞膜的表面。

在生理情况下，CD24分子仅在未成熟B细胞、成熟粒细胞以及少数上皮细胞和神经细胞上低水平表达；而当机体处于病理状态时，多数恶性肿瘤细胞的表面均能检测到显著高水平表达的CD24分子，其表达水平的高低与肿瘤的发生和发展密切相关。

P选择素表达于活化的血小板与内皮细胞表面，CD24是其配体之一。CD24分子高表达增强了肿瘤细胞对血小板及内皮细胞的粘附作用，促进了肿瘤的复发与转移。当然，作为细胞膜表面信号转导分子，CD24能够通过多种作用机制介导肿瘤细胞的的增殖、粘附、转移和侵袭。研究进一步发现，肿瘤细胞表达的CD24分子能够与巨噬细胞表面的抑制型受体siglec10结合，抑制巨噬细胞对肿瘤的吞噬作用。由此可见，CD24有望成为研究肿瘤发生机制及开发相关诊断试剂的新靶标。

抗体药物偶联物(ADC)是借助抗体的靶向性将药物递送至肿瘤区域，能够显著降低药物的脱靶效应，提高治疗窗。目前市售的ADC药物采用常规非特异偶联方法，经随机表面赖氨酸或还原的四个链间二硫化物的游离半胱氨酸。这产生高度异质性ADC混合物，不仅带来对生产重复性的挑战，还显著降低治疗指数。Junutula等(Nat Biotechnol 2008)通过在抗体恒定区引入工程化半胱氨酸，将药物分子特异性偶联在突变位点上，获得了均一的抗体药物偶联物，也为后续均质ADC的开发提供的新的思路。

发明内容

基于以上背景，本发明提供了一种CD24单克隆抗体，其重链、轻链可变区氨基酸序列及其CDR区如SEQ ID No.1～8所示。其恒定区为人IgG1型，降低了免疫原性且更易于表达。

本发明还提供了一种带有工程化半胱氨酸的CD24嵌合抗体序列，可用于制备均一的抗体偶联物，其工程化位点为重链按照EU编号239位氨基酸为半胱氨酸、轻链按照EU编号211位为半胱氨酸。具体氨基酸序列如SEQ ID No.9～10所示。

本发明的单克隆抗体可与CD24特异性结合，可以用于制备治疗与CD24表达异常或过量、失控相关疾病的药物；或用于制备Western blot、ELISA、流式细胞术检测CD24表达的产品中的应用。

有益效果

1、本发明提供一种全新CD24嵌合抗体，该抗体未见文献报道，本发明的单克隆抗体可与CD24特异性结合，可以用于制备治疗与CD24表达异常或过量、失控相关疾病的药物；或用于制备Western blot、ELISA、流式细胞术检测CD24表达的产品中的应用。

2、本发明的单克隆抗体的恒定区为人IgG1型，相比于鼠源单抗降低了对人体的免疫原性，且有利于在真核细胞中大量表达。并且，本发明利用半胱氨酸偶联的思路，通过overlap-PCR的方法，在CD24抗体分子上引入工程化半胱氨酸残基，该半胱氨酸残基能够与带有马来酰亚胺基团的药物发生迈克尔加成反应，可用于制备均一的CD24抗体-药物定点偶联物。