[发明专利]一种促进胰岛前体细胞长期稳定传代的方法

权利要求书

1.一种促进或保持胰岛前体细胞呈现PDX1和NKX6.1双阳性的方法，或者一种抑制或避免胰岛前体细胞分化为内分泌前体细胞的方法，或者一种抑制或避免胰岛前体细胞表达NGN3，NKX2.2，和/或NEUROD1标志物的方法，其特征在于，包括在培养胰岛前体细胞的培养基中加入至少一种BET抑制剂和一种TGFβ抑制剂。

2.一种体外制备胰岛细胞及胰岛类器官的方法，包括在胰岛前体细胞阶段采用含有至少一种BET抑制剂和一种TGFβ抑制剂的培养胰岛前体细胞的培养基对所述阶段的细胞进行培养。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在胰岛前体细胞阶段，细胞在所述培养基中至少扩增或传代5代，10代，15代，20代，25代，30代，35代，40代，45代，50代，55代，或60代。

4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，在胰岛前体细胞阶段之后，不再使用含有BET抑制剂的培养基对所述阶段的细胞进行培养。

5.一种体外扩增胰岛前体细胞的方法，其特征在于，包括：采用包含至少一种BET抑制剂和一种TGFβ抑制剂的培养胰岛前体细胞的培养基来培养胰岛前体细胞，并使所述细胞至少传代5代，10代，15代，20代，25代，30代，35代，40代，45代，50代，55代，或60代。

6.胰岛细胞及胰岛类器官或胰岛前体细胞在制备预防或治疗病症和/或疾病的药物中的用途，其特征在于，所述制备的过程包括经由权利要求2-4之一项所述的方法制备胰岛细胞及胰岛类器官的步骤，或包括实施权利要求5所述的方法；所述病症和/或疾病为糖尿病或糖尿病相关的病症和/或疾病。

7.一种筛选预防或治疗病症和/或疾病的药物的方法，其特征在于，包括：采用包含至少一种BET抑制剂和一种TGFβ抑制剂的培养胰岛前体细胞的培养基大量扩增胰岛前体细胞，再将扩增后的胰岛前体细胞分化为胰岛细胞及胰岛类器官；所述病症和/或疾病为糖尿病或糖尿病相关的病症和/或疾病。

8.一种制备治疗糖尿病或糖尿病相关的病症和/或疾病的药物的方法，包括在将足量的胰岛细胞及胰岛类器官植入受试者体内前，使胰岛前体细胞在含有至少一种BET抑制剂和一种TGFβ抑制剂的培养胰岛前体细胞的培养基中长期传代，以扩增胰岛前体细胞群，随后将胰岛前体细胞分化为胰岛细胞及胰岛类器官。

9.一种扩增胰岛前体细胞的培养基，其特征在于，所述培养基在基础培养基中添加至少一种BET抑制剂，所述基础培养基为EF6，所述EF6包含EGF，bFGF和一种TGFβ抑制剂。

10.如权利要求9所述的培养基，其特征在于，所述培养基的配方包含有效量的DMEM，B27，青霉素，链霉素，碱性成纤维细胞生长因子bFGF，表皮生长因子EGF，TGFβ抑制剂616452，和BET抑制剂I-BET151。

11.如前述任一权利要求，其特征在于，所述BET抑制剂靶向BRD2，BRD3，BRD4，和/或BRDT；或者所述TGFβ抑制剂包含E-616452，A83-01，A77-01，SB431542，GW788388，TGFβRI-IN-2，BIBF0775，ITD1，SJN2511，D4476，LY364947，SB505124，SB525334，SD208中的一种或多种；或者所述胰岛前体细胞来源于胚胎干细胞、围产期干细胞，成体干细胞，诱导多能干细胞，或生物工程干细胞。

12.如权利要求10中所述的诱导多能干细胞，其特征在于，其为人诱导多能干细胞。