[发明专利]一种用于检测杨梅果实颜色的KASP分子标记及其应用

权利要求书

1.一种用于检测杨梅果实颜色的KASP标记，其特征在于，所述KASP标记的SNP位点位于杨梅6号染色体第4,691,249位碱基，分子标记多态性为A/G。

2.一种用于检测权利要求1所述的KASP标记的引物组合，其特征在于，包括：

Ⅰ)两条正向引物为正向引物1和正向引物2，其中正向引物1序列如序列表中Seq IDNO.1所示，正向引物2序列如序列表中Seq ID NO.2所示；

Ⅱ)一条共用反向引物，其序列如序列表中Seq ID NO.3所示。

3.如权利要求2所述的引物组合，其特征在于，正向引物1的5’端带有FAM荧光信号标签；正向引物2的5’端带有HEX荧光信号标签。

4.含有权利要求2或3所述的引物组合的试剂或试剂盒。

5.采用如权利要求2或3所述的引物组合检测杨梅果实颜色的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测杨梅品种基因组DNA；

2)以待测杨梅品种基因组DNA为模板，利用权利要求2或3所述的引物组合进行KASP反应检测；

3)根据KASP产物荧光信号的差异，鉴别出待测杨梅的基因型。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)中KASP反应体系为：5～10ng/μl杨梅基因组DNA 0.8μl，KASP Master Mix 0.8μl，KASP Assay Mix 0.05μl。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中KASP反应程序为：95℃预变性，15min；95℃变性20s；65℃退火延伸25s，每个循环退火温度降低1℃，共10个循环；95℃变性10s，57℃退火延伸60s，共30个循环。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤3)为根据KASP产物荧光信号的差异，利用IntelliQube机器进行荧光数据读取和分析，鉴别出待测杨梅的基因型。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤3)鉴别出的杨梅基因型包括AA、GG和AG，其中AA为乌梅，AG为红梅，GG为白梅或红梅。

10.一种如权利要求1所述的KASP标记或权利要求2或3所述引物组合或权利要求4所述的试剂或试剂盒在鉴定杨梅果实颜色或杨梅辅助育种方面的用途。