[发明专利]检测14-3-3 eta蛋白的均相免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种用于检测14‑3‑3eta蛋白的均相免疫检测试剂盒。该试剂盒采用能够与14‑3‑3eta蛋白特异性结合的第一抗体和第二抗体制成；其以双抗体夹心的方式，利用光激化学发光免疫分析平台的灵敏度高、线性范围宽、精密度好等优势，为临床诊断类风湿提高确诊率，为预防类风湿和提早发现类风湿提供辅助检测。

本申请是申请日为2018年1月5日，申请号为201810011520.0，发明名称为“检测14-3-3eta蛋白的均相免疫检测试剂盒及其应用”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测14-3-3 eta蛋白的均相免疫检测试剂盒及其制备方法、使用方法。

背景技术

14-3-3eta(η)蛋白是一种新型的血清/血浆蛋白标志物，诱导炎症因子，如白细胞介素(IL)-1和-6，并联系到关节损伤。7种亚型中只有14-3-3η蛋白在RA活动性炎症滑膜和血清中高表达，并与RA前炎性因子表达和滑膜炎症呈正相关，且滑膜液14-3-3η蛋白水平至少高于血清水平5倍以上，提示滑膜是14-3-3η蛋白的主要来源。与健康的人相比，14-3-3η亚型在关节炎患者中高水平表达，这被认为与14-3-3η蛋白诱导相关的炎症因子和关节损伤的能力直接相关。

现有的检测14-3-3蛋白的方法均为非均相免疫检测法，这些方法灵敏较低，准确度不高，操作也较为复杂。并且，国内、外市场上尚没有发现商品化14-3-3eta蛋白检测试剂盒。曾报道有酶联免疫吸附法(ELISA法)检测患者血清中14-3-3eta蛋白，但是其灵敏较低，特异性也较差，操作也较为繁琐。

因此，目前亟需研究开发一种灵敏度高、特异性好、操作方法简便的14-3-3eta蛋白检测试剂盒。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于检测14-3-3 eta蛋白的光激化学发光免疫检测试剂盒。该试剂盒采用能够与14-3-3 eta蛋白特异性结合的第一抗体和第二抗体制成，结合光激化学发光技术制成；利用光激化学发光免疫分析平台的灵敏度高、线性范围宽、精密度好等优势，为临床诊断类风湿提高确诊率，为预防类风湿和提早发现类风湿提供辅助检测，成为类风湿新型标志物。

本发明第一方面检测14-3-3eta蛋白或其片段或所述14-3-3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的存在的在制备用于采用均相免疫检测方法通过下列步骤检测受治疗者的类风湿性关节炎的试剂中的用途：a)提供来自怀疑患有类风湿性关节炎的受治疗者的待测样品；b)检测所述待测样品中14-3-3eta蛋白或其片段或所述14-3-3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物；其中所述14-3-3eta蛋白或其片段或免疫复合物的存在指示受治疗者的类风湿性关节炎；其中，所述14-3-3eta蛋白或其片段包含至少一个14-3-3eta表位，所述待测样品选自血液、血浆、血清、滑膜液和组织。

在本发明的一些实施方式中，所述步骤还包括测量14-3-3eta蛋白或其片段或所述14-3-3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的含量。

在本发明的一些优选的实施例中，基于14-3-3 eta蛋白标准工作曲线来确定待测样品中14-3-3 eta蛋白的含量。

在本发明的一些实施方式中，所述步骤还包括将所测得的14-3-3eta蛋白或其片段或所述14-3-3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的含量，与正常对照样品、类风湿性关节炎对照样品或来自同一受治疗者的治疗前样品中所述14-3-3eta蛋白或其片段或所述14-3-3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的含量进行比较。

根据本发明，所述步骤包括将所述样品与包含能够与14-3-3eta蛋白或其片段的至少一种特异表位特异性结合形成免疫复合物的抗体。