[发明专利]一种利用亲和层析介质富集抗体的方法及其应用

权利要求书

1.一种利用亲和层析介质富集抗体的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将抗原和GST通过戊二醛交联形成抗原-GST复合物；

(2)将所述抗原-GST复合物与GST-标签纯化树脂连接，得到所述亲和层析介质；

(3)利用所述亲和层析介质富集抗体。

2.根据权利要求1所述的利用亲和层析介质富集抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述抗原和GST通过戊二醛交联形成抗原-GST复合物的步骤包括：

a.向抗原溶液中加入戊二醛并混合，孵育，去除多余的戊二醛；

b.将戊二醛处理后的抗原与GST溶液混合，孵育，向孵育后的溶液中加入硼氢化钠，还原。

3.根据权利要求2所述的利用亲和层析介质富集抗体的方法，其特征在于，步骤a中，所述抗原溶液为含有抗原的磷酸盐缓冲液，所述抗原溶液的pH为6.8～7.4；

优选地，步骤a中，所述抗原溶液中抗原的质量浓度为0.1～10mg/mL；

优选地，步骤a中，所述戊二醛与抗原溶液的体积比为(1.25～2.5):100；

优选地，步骤a中，所述孵育的时间为8～12h，所述孵育的温度为20～25℃；

优选地，步骤a中，所述去除多余的戊二醛采用G-25脱盐柱或分子筛进行；

优选地，步骤b中，所述GST溶液为含GST的碳酸钠溶液，所述GST溶液的pH为9.0～9.5；

优选地，步骤b中，所述GST溶液中GST的质量浓度为0.1～10mg/mL；

优选地，步骤b中，所述抗原与GST的摩尔比为(1～5):1；

优选地，步骤b中，所述孵育的温度为0～4℃，所述孵育的时间为8～12h；

优选地，步骤b中，所述硼氢化钠在溶液中的终浓度为9～10mg/mL；

优选地，步骤b中，所述还原的温度为0～4℃，所述还原的时间为0.8～1.2h。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的利用亲和层析介质富集抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述抗原-GST复合物的制备步骤还包括分离抗原-GST复合物；

优选地，所述分离采用分子筛进行。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的利用亲和层析介质富集抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述抗原-GST复合物与GST-标签纯化树脂连接的步骤包括：

将所述抗原-GST复合物和所述GST-标签纯化树脂混合后孵育，收集流穿液，检测孵育前后所述抗原-GST复合物的含量；

优选地，所述抗原-GST复合物和所述GST-标签纯化树脂混合的质量比为3:(200～300)；

优选地，所述孵育的时间为20～30min，所述孵育的温度为20～25℃；

优选地，所述检测采用分光光度计或免疫酶联吸附进行。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的利用亲和层析介质富集抗体的方法，其特征在于，步骤(3)中，利用所述亲和层析介质富集抗体的步骤包括：

A.将含有抗体的溶液与所述亲和层析介质孵育，收集流穿液，使用PBS清洗孵育后的亲和层析介质；

B.将洗脱液与亲和层析介质孵育，离心，收集洗脱液，得到抗体。

7.根据权利要求6中所述的利用亲和层析介质富集抗体的方法，其特征在于，步骤A中，所述孵育的时间为1.5～2.5h，所述孵育的温度为20～25℃；

优选地，步骤A中，所述PBS的使用量不小于亲和层析介质体积的2倍。

8.根据权利要求6或7中所述的利用亲和层析介质富集抗体的方法，其特征在于，步骤B中，所述洗脱液为柠檬酸钠洗脱液；

优选地，步骤B中，所述柠檬酸钠洗脱液的浓度为0.08～0.12M；

优选地，步骤B中，所述孵育的时间为5～15min，所述孵育的温度为20～25℃；

优选地，步骤B中，所述离心的转速为2500～3500rpm，所述离心的时间为1～5min，所述离心的温度为0～4℃。