[发明专利]一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒，涉及生物检测技术领域。所述检测试剂盒包含PCR反应液、内标、PCR酶混合液、定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D、阳性对照品、阴性对照品。所述PCR反应液中加入了海藻糖、甘油等PCR增强剂和酶稳定剂，提高试剂的分析灵敏度。本发明乙肝病毒核酸检测试剂盒，显著改善了试剂盒的分析灵敏度。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒。

背景技术

聚合酶链式反应(PCR，Polymerase chain reaction)是利用DNA双链复制的原理，在生物体外大量扩增特定DNA片段的分子生物学技术，其特点是可以以微量的DNA为模板，快速扩增得到大量拷贝。

实时荧光定量PCR(real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 Real-time PCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

TaqMan荧光探针是PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR产物形成完全同步。

目前，进行PCR扩增反应一般需要较高的样本浓度，而样本浓度较低时需要重复进行检测或使用精确度更高的数字PCR方法。数字PCR试剂耗材本身价格较高，因此，加大了使用成本。于是，提高荧光探针法的分析灵敏度，控制最低检出量，能够极大的节约成本。

发明内容

本发明提供了一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒。本发明检测试剂盒可以提高试剂的分析灵敏度。

为实现上述目的，本发明的乙肝病毒核酸检测试剂盒是通过以下技术方案实现的：

本发明提供一种分析灵敏度高的乙肝病毒核酸检测试剂盒，包括PCR 反应液、内标、PCR酶混合液、定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D、阳性对照品、阴性对照品，其中PCR反应液的成分和含量如下：

进一步的，所述PCR酶混合液的成分和含量如下：

所述阴性对照品为不含乙肝病毒靶基因序列的病毒样颗粒。

所述阳性对照品为含有乙肝病毒靶基因序列的阳性病毒样颗粒。

所述内标为含如下序列的质粒： cactcacagttaatgagaaaagaagattgcaattgattatgcctgccaggttttatccaaaggttaccaaatatttac cattggataagggtattaaaccttattatccagaacatctagttaatcattacttccaaactaga

所述定量参考品A、定量参考品B、定量参考品C、定量参考品D为含有乙肝病毒靶基因序列的阳性病毒样颗粒，其序列为 tgttaatttggaagatccagcgtctagagacctagtagtcagttatgtcaacactaatatgggcctaaagttcaggc aactcttgtggtttcacatttcttgtctcacttttggaagagaaacagttatagagtatttggtgtctttcggagtgtgga ttcgcactcctccagc。