[发明专利]一种通过功能标记的玉米矮秆选育方法

权利要求书

1.一种通过功能标记的玉米矮秆选育方法，其特征在于，该选育方法的具体操作步骤如下：

利用郑58、昌7-2、浚9058、92-8以及RIL88通过回交转育方法群体回交三代后自交获得BC₃F₂，采用InDel-220单株检测籽粒基因型，利用InDel-220标记辅助选择，选择扩增出220bp带型的纯合籽粒种植，田间鉴定农艺性状，重点观测株高性状，通过种质资源一致性分析40对引物，对改良的矮秆郑58、浚9058、昌7-2、92-8进行背景检测，确定改良材料的恢复率，获得稳定遗传的4类材料。

2.根据权利要求1所述的一种通过功能标记的玉米矮秆选育方法，其特征在于，所述回交转育方法的具体操作步骤如下：

郑58和RIL88杂交后的子一代与郑58进行杂交；

昌7-2和RIL88杂交后的子一代与昌7-2进行杂交；

浚9058和RIL88杂交后的子一代与浚9058进行杂交；

92-8和RIL88杂交后的子一代与92-8进行杂交。

3.根据权利要求1所述的一种通过功能标记的玉米矮秆选育方法，其特征在于，InDel-220功能标记开发具体操作步骤如下：

采用DNAMAN软件比对查找高亲和低亲br₂扩增序列的核苷酸突变位点，根据序列差异设计特异性引物，开发分子标记，利用设计的引物，扩增矮秆自交系RIL88和高秆自交系材料，判定开发标记鉴定矮秆的有效性，扩大检测群体，经过检测株高鉴定的202份玉米自交系，6％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，比较标记基因型在植株高低自交系之间的带型分布，利用卡平方独立性测验分析标记与株高的相关性，其中采用磁珠法提取DNA。

4.根据权利要求3所述的一种通过功能标记的玉米矮秆选育方法，其特征在于，扩增体系和程序的具体操作步骤如下：

标记初步验证扩增采用10μL反应体系，标记大量检测采用5μL反应体系，5μL体系中含有1μL DNA，40μg/μL、2.5μL 2×TaqMIX酶、0.1μL Primer1，40μM、0.1μL Primer2，40μM、1.3μL ddH₂O，10μL反应体系按比例增加各组分；

PCR在PTC-200扩增仪上进行，扩增程序为95℃预变性5min；95℃变性45s，退火50s，72℃延伸60s，30个循环；72℃延伸10min。反应结束后加入2μL 6×loading buffer 95℃变性5min，立即取出放在冰水混合物中1min后低温保存。