[发明专利]一种适用于特异感染U87-MG细胞的腺相关病毒突变体

说明书

本发明提供了一种适用于特异感染U87‑MG细胞的腺相关病毒突变体。本发明利用AAV2/2的肽段突变文库，通过文库筛选获得可高效、特异感染U87‑MG的AAV血清型突变体。通过体外杀伤实验证实：本发明筛选得到的AAV血清型突变体能够特异性的感染和杀伤U87‑MG细胞，在体外研究胶质瘤发生发展的机理及胶质瘤治疗药物的开发方面有广泛的应用。

技术领域

本发明涉及病毒包装及筛选，尤其涉及腺相关病毒突变体的筛选。

背景技术

神经脑胶质细胞瘤(Glioma)是中枢神经系统常见的原发性恶性脑瘤，具有复发性高、预后效果差、患者的死亡率高等特性，是目前最致命的肿瘤之一。目前对于胶质瘤还没有特别有效的治疗策略，现有核心的治疗手段仍然是对瘤体进行常规的最大范围内切除手术，以及放射治疗和化学治疗等。但由于脑胶质瘤恶性浸润性生长等特性，常规手术和化疗放疗法只能极少地改善生活质量并略微延长一些患者的生存期，对于脑胶质瘤确诊后的五年生存率并没有明显改善，且易复发。

腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。是目前发现的一类结构最简单的单链DNA缺陷型病毒，需要辅助病毒(通常为腺病毒或疱疹病毒)来完成病毒包装。由于其安全性好、宿主细胞范围广(分裂和非分裂细胞)、免疫源性低，在体内表达外源基因时间长等特点，被视为最有前途的基因转移载体之一，在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。

U87-MG是人脑星形胶质母细胞瘤细胞，自从1966年由瑞典乌普萨拉大学首次建立后，就被全世界广泛使用；U87-MG源于恶性神经胶质瘤，此细胞裸鼠皮下接种可成瘤，所以该细胞系常被用作人胶质母细胞瘤体外研究的工具模型，在此细胞系上进行相关的机理研究和治疗效果检测。但此细胞转染效率不高，用腺相关病毒AAV感染效率较低，且目前尚未有特异感染的血清型。

不同的腺相关病毒的血清型由于其具有不同的衣壳蛋白序列及空间构象，导致其识别结合的细胞表面受体也不同，因此感染的细胞、组织类型及感染效率也有较大的差别。现有的AAV血清型(AAV2/2)感染胶质瘤细胞系(U87-MG)效率低，且特异差，在相同的MOI(感染复数)下，对常用的工具细胞(293T和NIH3T3)的感染效果更好。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，为了更好地在体外对胶质瘤细胞模型(U87-MG)进行相关的研究，并将腺相关病毒应用于胶质瘤的治疗中，本发明利用AAV2/2的肽段突变文库，通过文库筛选获得可高效、特异感染U87-MG的AAV血清型突变体，为体外研究胶质瘤发生发展的机理及胶质瘤治疗药物的开发提供了一种强大的工具。

本发明公开了一种异源肽，其特征在于，所述异源肽为：

(a)氨基酸序列为KENDTKG或LHANKLE所组成的多肽；或者

(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有异源肽活性的由(a)衍生出的多肽。

本发明还公开了定点突变的AAV2/2衣壳蛋白，其特征在于，所述衣壳蛋白氨基酸587～588之间被所述的异源肽插入。

本发明公开了AAV2/2血清型突变体，其特征在于，包括所述的衣壳蛋白。

本发明公开了一种核酸分子，其特征在于，编码所述的衣壳蛋白或所述的突变体。

本发明公开了一种核酸载体，其可操作地连接有所述的核酸分子。

本发明提供了一种宿主细胞，其特征在于，含有所述的核酸载体。

本发明提供了一种组合物或试剂盒，含有所述的衣壳蛋白或3所述的突变体或所述的核酸分子或所述的核酸载体。