[发明专利]一种发酵法制备苦瓜多肽的方法

权利要求书

1.一种发酵法制备苦瓜多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a）苦瓜籽预处理，米曲霉菌种活化，米曲霉液体培养基扩培；

所述米曲霉（Aspergillus oryzae）为产纤维素酶和/或脂肪酶和/或蛋白酶的米曲霉菌株；

b）将扩培的菌种接种到苦瓜籽预处理料中，进行发酵，发酵完成后将发酵料干燥，粉碎；

c）采用乙醇溶液提取苦瓜籽多肽，离心收集过滤，蒸馏，获得苦瓜多肽水溶液，加水调整溶液体积，用氨水调pH，离心，取上清液；

d）用酸调pH值，加入无水乙醇，进行沉淀，收集沉淀，烘干得苦瓜多肽。

2.根据权利要求1所述的发酵法制备苦瓜多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a）苦瓜籽预处理：将新鲜苦瓜籽料或浸泡后的干苦瓜籽料碾碎成大小为0.5-1.5mm颗粒，使苦瓜籽的质量含水量为55-75%，进行米曲霉菌种活化和米曲霉液体培养基扩培；

所述的米曲霉菌种活化是，将米曲霉菌种接种于经过无菌验证的土豆培养基的试管斜面或平板中，土豆培养基是，马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂 15~20g，加蒸馏水1000mL制成，然后将接种后的斜面或平板在26～30℃下培养72h，得活化米曲霉菌种；

所述的米曲霉液体培养基扩培，方法是，取500mL的锥形瓶，添加液体培养基200mL，每升液体培养基中含有苦瓜籽粉10-30g、蛋白胨50g、苦瓜籽油2-8mL、硝酸钠2g、磷酸氢二钾1g、氯化钠0.5g和硫酸亚铁0.01g，将液体培养基进行湿热灭菌，灭菌温度121℃，时间为15min；培养基温度降到23-27℃，移至超净工作台，接入活化米曲霉菌种，在26-30℃恒温摇床中培养，摇床振荡频率为200r/min，培养时间为36h，得扩培菌种；

b）将扩培菌种接种到预处理料的苦瓜籽中，苦瓜籽料与扩培菌种的质量体积比为18-22︰1 g/mL，质量体积是指固体质量以g计，液体以mL计，进行发酵，温度28-32℃，湿度85-95%，发酵48-72h，发酵期间每8h翻拌一次，再将发酵料干燥，粉碎，得干燥的发酵苦瓜籽粉；

c）乙醇溶液提取苦瓜籽多肽，发酵苦瓜籽粉加入质量浓度85%乙醇浸没，22℃下浸泡提取30h，离心、过滤，滤液蒸馏回收乙醇，得固体物，固体物用水悬浮，用氨水调pH 9.7，离心，得上清液；

d）调pH值：上清液用1N的盐酸调pH值至3.5，加入等体积的无水乙醇，4℃下放置16小时，得沉淀，沉淀于44℃以下进行真空干燥，干燥后粉碎，过 100 目筛，即得苦瓜多肽，多肽分子量分布在5-6kDa。