[发明专利]一种基于微流控阻抗法检测病毒的方法

说明书

本发明公开了一种基于微流控阻抗法检测病毒的方法，属于检测技术领域，本发明可以通过微流控芯片系统为平台，将ToRSV抗体通过自然沉降法，与微流控芯片内金叉指阵列微电极进行固结，当含有ToRSV抗原的检测物溶液注入到介观尺度的微通道内时，与抗体发生反应并形成特异性复合物，该特异性复合物附着在金叉指微电极表面，能够改变微电极的阻抗特性，因此，通过测量微电极的阻抗变化量，确定最佳的检测频率，即能实现ToRSV的检测，进一步，通过研究阻抗值与待检测物浓度之间的定量关系，构建阻抗‑浓度变化模型，实现对ToRSV的定量检测。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，更具体地说，涉及一种基于微流控阻抗法检测病毒的方法。

背景技术

番茄环斑病毒，寄主范围广，可侵染35科105属157种以上单子叶和双子叶植物。常见的自然寄主有葡萄、桃、李、樱桃、苹果、榆树等及果园杂草，番茄溃疡病于1995年列入修订的“全国农业植物检疫对象名单”中。1997年被列入“中华人民共和国进境植物检疫潜在危险性病、虫、杂草名录”中。还被欧洲植物保护组织(EPPO)列入A2类检疫性有害生物名单中，是中国-蒙古植物检疫协定中规定的危险性病害。

微流控(Microfluidics)指的是使用微管道(尺寸为数十到数百微米)处理或操纵微小流体(体积为纳升到阿升)的系统所涉及的科学和技术，是一门涉及化学、流体物理、微电子、新材料、生物学和生物医学工程的新兴交叉学科。因为具有微型化、集成化等特征，微流控装置通常被称为微流控芯片，也被称为芯片实验室(Lab on a Chip)和微全分析系统(micro-Total Analytical System)。微流控的早期概念可以追溯到19世纪70年代采用光刻技术在硅片上制作的气相色谱仪，而后又发展为微流控毛细管电泳仪和微反应器等。微流控的重要特征之一是微尺度环境下具有独特的流体性质，如层流和液滴等。借助这些独特的流体现象，微流控可以实现一系列常规方法所难以完成的微加工和微操作。目前，微流控被认为在生物医学研究中具有巨大的发展潜力和广泛的应用前景。

为此，我们提出一种基于微流控阻抗法检测病毒的方法。

发明内容

1.要解决的技术问题

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种基于微流控阻抗法检测病毒的方法，可以通过微流控芯片系统为平台，将ToRSV抗体通过自然沉降法，与微流控芯片内金叉指阵列微电极进行固结，当含有ToRSV抗原的检测物溶液注入到介观尺度的微通道内时，与抗体发生反应并形成特异性复合物，该特异性复合物附着在金叉指微电极表面，能够改变微电极的阻抗特性，因此，通过测量微电极的阻抗变化量，确定最佳的检测频率，即能实现ToRSV的检测，进一步，通过研究阻抗值与待检测物浓度之间的定量关系，构建阻抗-浓度变化模型，实现对ToRSV的定量检测。

2.技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种基于微流控阻抗法检测病毒的方法，包括以下步骤：

S1、芯片设计及参数设置：制作和设计微流控芯片，同时设置好相应的阻抗测试参数，然后搭建检测平台；

S2、裸电极测量：注入PBS缓冲液测量裸电极的阻抗值，测量完成后持续注入超纯水3min清洗微通道及微电极；

S3、抗体固定：注入15μL0.5mg/mL的ToRSV抗体使之充满微通道，静置2h，在此期间，由于抗体蛋白对金属金的吸附性，抗体会被非特异性地吸附在金电极表面，2h之后用超纯水清洗除去未吸附的抗体，注入PBS缓冲液测量阻抗值,测量完成后重复清洗操作；

S4、BSA封闭：注入15μL1％BSA溶液，静置30min，其作用是封闭未被抗体附着的金电极表面，以免产生多余的干扰信号，30min后清洗掉多余的BSA，注入PBS缓冲液测量阻抗值，测量完成后重复清洗操作；