[发明专利]一种脱氮基因工程菌的培养方法及装置及应用

说明书

本发明公开了一种脱氮基因工程菌的培养方法及装置及应用，包括培养室以及安装在所述培养室内壁上的加热片，所述培养室的内部安装有吹风机构，所述培养室内部的上下两侧还分别安装有放置机构以及鼓风机构，所述培养室的一侧安装有出风管，所述培养室的另一侧安装有进风管，所述吹风机构包括固定连接在所述培养室内壁侧面的安装板。本发明，既能够增加培养装置内部的空气流动，从而保证了培养装置内部各个角落的温度均一致，而且可以实现放置在培养装置内部的培养皿进行不断移动，从而保证了每个培养皿都能够接触同等的热量、光照等，并且方便对培养装置内部的温度进行调控，保证了工程菌处在最佳的培养状态，因此提高了工程菌培养的质量。

技术领域

本发明涉及脱氮基因工程菌技术领域，具体来说，涉及一种脱氮基因工程菌的培养方法，尤其还涉及一种脱氮基因工程菌的培养装置及应用。

背景技术

工程菌是采用现代生物工程技术加工出来的新型微生物，具有多功能、高效和适应性强等特点；工程菌通常采用培养装置进行培养，而现有技术中的培养装置存在受热不均匀，以及不便于对培养装置内部的温度进行调控，从而导致工程菌受热不均，进而影响工程菌的构建的问题。

为此，我们提出一种脱氮基因工程菌的培养方法及装置及应用。

发明内容

本发明的技术任务是针对以上不足，提供一种脱氮基因工程菌的培养方法及装置及应用，既能够增加培养装置内部的空气流动，从而保证了培养装置内部各个角落的温度均一致，而且可以实现放置在培养装置内部的培养皿进行不断移动，从而保证了每个培养皿都能够接触同等的热量、光照等，并且方便对培养装置内部的温度进行调控，保证了工程菌处在最佳的培养状态，因此提高了工程菌培养的质量，来解决上述问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供了一种脱氮基因工程菌的培养方法，包括以下步骤：

S1、采集原位水水样，制作DNA样本，并通过培养设备进行培养；

S2、根据数据库中报道的氨氧化细菌amo A基因序列设计简并引物，以B.subtilis168DN作为宿主菌，构建amo A基因文库，通过高通量方法初步筛选高活性的amo A基因，再通过复筛和分子手段(采用通用引物以及特异性引物进行菌落PCR验证)进一步对初筛菌株的amo A活性进行验证；

S3、HAO、NOS基因同上；

S4、以B.subtilis 168DN作为宿主菌，将筛选到的amo A基因、hao基因、nos基因共表达；

S5、将宏基因文库和基因突变基因技术应用于氨氧化酶工程菌的构建，即另采用易错PCR方法，提高突变谱的多样性，筛选高活性氨氧化酶突变基因，后将AMO-HAO-NOS三种基因进行串联，构建高活性氨氧化工程菌。

本发明还提供了一种脱氮基因工程菌的培养装置，包括上述所述的培养设备，所述培养设备包括培养室以及安装在所述培养室内壁上的加热片，所述培养室的内部安装有吹风机构，所述培养室内部的上下两侧还分别安装有放置机构以及鼓风机构，所述培养室的一侧安装有出风管，所述培养室的另一侧安装有进风管；

其中，所述吹风机构包括固定连接在所述培养室内壁侧面的安装板，所述安装板的侧面固定连接有对称设置的连接弹簧，两个所述连接弹簧的另一端通过复位板固定连接，所述复位板的顶部固定连接有吹风机，所述培养室的侧面还固定连接有安装架，所述安装架上固定连接有伺服电机，且所述伺服电机的输出轴活动贯穿所述安装架设置，所述伺服电机的输出轴上固定连接有收卷辊，所述收卷辊上缠绕设置有拉绳，所述拉绳远离所述收卷辊的一端与所述复位板侧面的中心处固定连接；

其中，所述放置机构由旋转组件以及等距离安装在所述旋转组件上的若干个放置组件构成；