[发明专利]一种菜豆金色花叶病毒属RPA-LFD检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种菜豆金色花叶病毒属RPA‑LFD检测试剂盒及其应用，涉及基因工程技术领域，包含如下引物组和核酸检测试纸条：所述的引物组的核苷酸序列如下所示：FITC‑Beg‑310R：FITC‑TGTGTGAGTCCGGTTCCTCGTGTAACATC，RPA‑Beg‑64F：AACTTCGACAGCCCATATGTTTCCCGTG；探针Bio‑Beg‑Probe：Biotin‑GACAAACAGGCCGATGAACAGAAAACCAAAG(THF)ATGTACAGGATGTA‑PHO。本发明引物和探针适用于菜豆金色花叶病毒属，能够有效且特异的检测该属四种病毒的外壳蛋白片段，可以高效灵敏的检测菜豆金色花叶病毒属的4种病毒，同时本发明将RPA所需试剂按照一定比例混合，应用此配比下的试验反应可以高效灵敏的检测菜豆金色花叶病毒属的中国南瓜曲叶病毒(SLCCNV)、烟草曲茎病毒(ToCSV)、甜瓜曲叶病毒(MLCV)和辣椒曲叶病毒(PepLCV)四种病毒。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种菜豆金色花叶病毒属RPA-LFD检测试剂盒及其应用。

背景技术

菜豆金色花叶病毒属的病毒粒子为双联体结构，无包膜，由两个不完整的二十面体组成。是有效的免疫源。该属病毒在寄主植物中的分布局限于韧皮部及相邻的薄壁细胞，病毒侵染后细胞核呈现明显的病理变化，核膨大并形成颗粒状结构和纤维状结构，纤维状物质可浓缩成各种大小的环。现有的技术菜豆金色花叶病毒属检测都是单个病毒的RPA-LFD的检测，不能针对多种病毒进行检测，因此，提出一种菜豆金色花叶病毒属RPA-LFD检测试剂盒及其应用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种菜豆金色花叶病毒属RPA-LFD检测试剂盒及其应用。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

本发明提供了一种菜豆金色花叶病毒属RPA-LFD检测试剂盒，包含如下引物组和核酸检测试纸条：

所述的引物组的核苷酸序列如下所示：

FITC-Beg-310R：FITC-TGTGTGAGTCCGGTTCCTCGTGTAACATC，

RPA-Beg-64F：AACTTCGACAGCCCATATGTTTCCCGTG；

探针Bio-Beg-Probe：

Biotin-GACAAACAGGCCGATGAACAGAAAACCAAAG(THF)ATGTACAGGATGTA-PHO。

进一步改进在于，所述的核酸检测试纸条为通用型核酸检测试纸条。

本发明还提供了一种上述的菜豆金色花叶病毒属RPA-LFD检测试剂盒在检测菜豆金色花叶病毒属中的应用。

进一步改进在于，所述菜豆金色花叶病毒属包括中国南瓜曲叶病毒(SLCCNV)、烟草曲茎病毒(ToCSV)、甜瓜曲叶病毒(MLCV)和辣椒曲叶病毒(PepLCV)。

进一步改进在于，RPA反应试剂包括以下成分：BufferA：50mMTris(pH7.9)，100mM醋酸钾，2mMDTT，5％Carbowax20M，200μMdNTPs，3mMATP，50mM磷酸肌酸，100ng/μl肌酸激酶，30ng/μlBsu；10μM上游引物，10μM下游引物，探针，ddH₂O；14mM醋酸镁。

进一步改进在于，除醋酸镁外，预先将上述试剂混合制成预混液，该预混液比例为BufferA29.5μl，上游引物2.1μl，下游引物3μl，探针0.6μl，ddH₂O11.3μl，待进行试验时再加入1-2μl模板和2.5μl醋酸镁，反应即可开始。

进一步改进在于，包含以下步骤：