[发明专利]腺相关病毒载体在逆向标记外周组织或器官一级神经网络中的应用

说明书

本发明涉及腺相关病毒载体在逆向标记外周组织或器官一级神经网络中的应用，具体公开了腺相关病毒载体在标记支配外周组织或器官的一级神经网络的应用，或者在制备标记支配外周组织或器官的一级神经网络的试剂中的应用；所述腺相关病毒载体为AAV9‑retro，所述腺相关病毒载体中还包含编码标记蛋白的基因和启动子；一级神经网络为支配外周组织或器官的神经元、神经胶质细胞。本发明发现了腺相关病毒AAV9‑retro载体能够将目的基因表达在支配外周组织或器官的神经元中，基于此AAV9‑retro载体可以携带目的基因用于标记、操控周围神经系统，也可以作为基因治疗的载体。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及腺相关病毒载体在逆向标记外周组织或器官一级神经网络中的应用。

背景技术

近些年，脑肠轴已经成为大家关注的焦点，被称为第二大脑的肠道与中枢神经系统之间存在着互相投射而形成千丝万缕的联系。事实上，除了肠道之外，肾脏、心脏、肝脏、脾等外周组织、器官均与中枢神经系统存在密切的解剖学连接，接受中枢神经系统的调控以执行不同的功能。然而，缺乏有效的工具病毒载体使得人们对这些协调过程知之甚少。

工具病毒作为高效载体在神经环路研究中扮演着重要的角色。它不仅可以靶向特定类型的神经细胞，而且可携带目的基因在靶细胞内高效表达。目前，常用顺向跨多级突触的单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)和逆向跨多级突触的伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)探究中枢-外周神经环路，但针对外周单级神经网络的解析还缺乏高效的载体。虽然利用AAV2-retro在周围神经系统中实现了单级网络的解析，但受限于效率较低而无法推广。鉴于脑肠轴等系列中枢与外周神经系统协同作用的研究需求，亟需发展一套可用于解析外周一级神经网络的工具病毒载体。

发明内容

基于目前现有技术中存在的缺陷，本发明提供了一种腺相关病毒载体AAV9-retro的新用途，即利用携带目的基因的AAV9-retro载体感染外周组织或器官，从而实现对外周组织或器官的逆向一级神经网络进行标记或操控的方法。该方法为研究外周器官或组织的神经生理学功能研究提供了新手段，且在周围神经系统性疾病模型的建立和基因治疗领域等具有广泛的应用价值和市场前景。

本发明一个方面提供了腺相关病毒载体在标记支配外周组织或器官的一级神经网络的应用，或者在制备标记支配外周组织或器官的一级神经网络的试剂中的应用；所述腺相关病毒载体为AAV9-retro，所述腺相关病毒载体中还包含编码标记蛋白的基因和启动子。

进一步地，所述外周组织选自外周神经组织、肌肉、上皮组织、结缔组织等；更优选为外周神经节、骨骼肌、平滑肌、心肌、表皮、腺体、真皮、脂肪、骨、软骨、韧带等。

进一步地，所述器官选自膀胱、眼、耳、鼻、口腔、舌、咽、喉、犁鼻器、唾液腺、肝、肾、脾、心、肠道、胃、胰腺、肺、气管、血管、淋巴管、淋巴结、四肢、垂体、甲状腺、甲状旁腺、胰岛、肾上腺、生殖器等。

进一步地，所述标记蛋白选自荧光蛋白、酶反应显色蛋白等，更优选为BFP、CFP、GFP、YFP、RFP、iRFP、Cerulean、Venus、eGFP、eCFP、eYFP、eBFP、DsRed、dTomato、tdTomato、mCherry、mKate、mApple、mBanana、mCitrine、mOrange、mPlum、tagRFP、tagBFP、HRP等。

进一步地，所述启动子选自CAG、CMV、Ef1α、nEF、hSyn、CaMKIIα、Vgat、Thy1、TRE、UAS、GFAP、gfaABC1D等。

进一步地，一级神经网络为支配外周组织或器官的神经元、神经胶质细胞。

本发明另一个方面提供了支配外周组织或器官的一级神经网络的标记方法，所述标记方法包括以下步骤：

S1)将腺相关病毒载体注射至待标记的外周组织或器官中，