[发明专利]一株贝莱斯芽孢杆菌及其在植物病害防治中的应用

说明书

本发明公开了一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)GL‑03，保藏号为CGMCCNo.16931。同时公开了以该菌株为活性成分的微生物菌剂，该微生物菌剂施用后对禾谷镰孢菌、层出镰孢菌、拟轮枝镰孢菌、玉米大斑病菌、玉米小斑病菌、哈茨木霉菌、新月弯孢菌造成的植物真菌病害有较好的防治效果。该菌株可以多种形式在农业生产中发挥其功能，菌液可用来灌根，粉剂可用来拌种，也可制成生物复合肥料进行施用，具有显著减少玉米茎腐病病害、提高作物产量和改善品质的作用。

技术领域

本发明涉及微生物学和植物病害生防技术领域，具体地说，涉及一株贝莱斯芽孢杆菌、微生物菌剂及应用。

背景技术

玉米茎腐病是危害玉米产量与品质的主要病害，它可导致玉米植株倒伏，造成果穗腐烂。主要致病真菌多为禾谷镰孢菌，禾谷镰孢菌是一种土传真菌，也会产生呕吐毒素，食用会对人类的身体健康产生危害。目前，针对玉米茎腐病，大多采用化学农药的方法，这类方法虽见效快、操作简单，但会对环境造成危害。

植物根际细菌是定殖在植物根际的有益细菌，可在一定程度上防控真菌病害，引起了很多研究者的重视，多被用来研究生物防控。

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)是一类产芽孢的革兰氏阳性菌，周生鞭毛，形态多为杆状，具有适应能力强、生长速度快、抑菌能力强等特点。它是一种解淀粉芽孢杆菌后期异型体，能够产生多种次级代谢产物，如：酶、抗菌物质等。对多种植物病原真菌均具有拮抗作用，成为近些年生防芽孢杆菌的研究热点。它还能够分泌IAA(吲哚乙酸)和铁离子载体来促进植物生长，具有显著的促生作用。

但是目前己知的贝莱斯芽孢杆菌仍存在一些弊端，例如：大多防控效果不佳、作用对象比较单一等弊端。这些问题会导致该菌株对植物病害的防治效果大大降低。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一株贝莱斯芽孢杆菌、微生物菌剂及应用。

本发明为达到上述目的，采用的技术方案如下：

1.本发明从辽宁省沈阳市东陵农田茎腐病发病严重的玉米植株根际土壤中分离并纯化得到菌株GL-03。经鉴定，其为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。

菌株GL-03的鉴定过程如下：

GL-03菌株在NA培养基平板上培养时，菌落呈乳白色，圆形，边缘不规则褶皱泛，中心隆起。显微观察菌体为单细胞，杆状，革兰氏染色阴性。利用生理生化指标对其进行鉴定后发现，其淀粉水解、明胶水解、V-P测定等呈阳性；M.R.反应、亚硝酸盐还原试验、丙二酸盐试验、苯丙氨酸脱氨酶试验、H2S产生试验等为阴性。然后利用分子生物学手段，采用16SrDNA基因特异引物对该菌株特异性片段进行扩增，将扩增产物回收并测序，将测序结果进行Blast分析，结果发现与菌株GL-03高度同源的菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)，并结合生理生化特征，鉴定其为贝莱斯芽孢杆菌属。

2.作为本发明的第二个方面，本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌GL-03菌株制备的微生物菌剂。

微生物菌剂采用如下方法制备：

将所述贝莱斯芽孢杆菌GL-03菌株在LB液体培养基中培养，培养温度为37℃，培养时间为48h，转速为220rpm，发酵液离心后，将菌体用生理盐水悬浮，调节细胞数调节为1～1.5×10⁸cfu/m L，与灭菌淀粉混合，贝莱斯芽孢杆菌的菌悬液与灭菌淀粉的比例为V菌悬液：M淀粉＝1～2：1～2，室温阴凉处晾干，即制得本发明的贝莱斯芽孢杆菌菌剂。

3.作为本发明的第三方面，本发明提供了贝莱斯芽孢杆菌GL-03菌株及包含该菌株的生物菌剂在防治植物真菌病害领域的应用。