[发明专利]增强氨基酸合成基因的转录水平以提高TG酶发酵水平的方法

权利要求书

1.一种通过增强氨基酸合成基因的转录水平而获得的TG酶高产菌株，其特征在于，所述菌株的脯氨酸、组氨酸、芳香族氨基酸或精氨酸合成途径中的基因过量表达。

2.如权利要求1所述的增TG酶高产菌株，其特征在于，在茂源链霉菌IPIO中分别过量表达来源于茂源链霉菌IPIO的脯氨酸合成基因SMDS_4329-SMDS_4331、组氨酸合成基因SMDS_4883-SMDS_4890、芳香族氨基酸合成基因SMDS_5474-SMDS_5478、精氨酸合成基因SMDS_5364-SMDS_5368和精氨酸合成基因SMDS_5394-SMDS_5395。

3.一种用于过量表达氨基酸合成基因的整合型质粒载体，其特征在于，所述载体包含源于茂源链霉菌IPIO的脯氨酸合成基因SMDS_4329-SMDS_4331及其启动子P_proB，组氨酸合成基因SMDS_4883-SMDS_4890及其启动子P_hisD，芳香族氨基酸合成基因SMDS_5474-SMDS_5478及其启动子P_aroE，或精氨酸合成基因SMDS_5364-SMDS_5368、SMDS_5394-SMDS_5395及其启动子P₅₃₆₄、P₅₃₉₄。

4.根据权利要求3所述的整合型质粒载体，其特征在于，

所述脯氨酸合成基因SMDS_4329-SMDS_4331的序列如SEQ ID NO.1-NO.3所示，所述启动子P_proB的序列如SEQ ID NO.4所示；

所述组氨酸合成基因SMDS_4883-SMDS_4890的序列如SEQ ID NO.5-NO.12所示，所述启动子P_hisD的序列如SEQ ID NO.13所示；

所述芳香族氨基酸合成基因SMDS_5474-SMDS_5478的序列如SEQ ID NO.14-NO.18所示，所述启动子P_aroE的序列如SEQ ID NO.19所示；

所述精氨酸合成基因SMDS_5364-SMDS_5368的序列如SEQ ID NO.20-NO.24所示，所述启动子P₅₃₆₄的序列如SEQ ID NO.27所示；

所述精氨酸合成基因SMDS_5394-SMDS_5395的序列如SEQ ID NO.25-NO.26所示，所述启动子P₅₃₉₄的序列如SEQ ID NO.28所示。

5.一种根据权利要求3或4所述的整合型质粒载体的构建方法，其特征在于，构建步骤如下：

通过PCR扩增得到P_proB和SMDS_4329-SMDS_4331基因序列的PCR片段，通过酶切连接的方法连入整合型质粒pSET152中的XbaI/EcoRI位点，获得整合型质粒载体pLQ1766；

或，通过PCR扩增得到P_hisD和SMDS_4883-SMDS_4890基因序列的PCR片段，通过Gibson连接的方法连入整合型质粒pSET152中的XbaI/EcoRI位点，获得整合型质粒载体pLQ1769；

或，通过PCR扩增得到P_aroE和SMDS_5474-SMDS_5478基因序列的PCR片段，通过Gibson连接的方法连入整合型质粒pSET152中的XbaI/EcoRI位点，获得整合型质粒载体pLQ1770；

或通过PCR扩增得到P₅₃₆₄和SMDS_5364-SMDS_5368基因序列的PCR片段与3255bp的P₅₃₉₄和SMDS_5394-SMDS_5395基因序列的PCR片段，通过酶切连接的方法连入整合型质粒pSET152中的XbaI/SpeI位点，获得整合型质粒载体pLQ1772。

6.一种高产谷氨酰胺转氨酶的茂源链霉菌菌株，其特征在于，将如权利要求3或4所述的整合型质粒载体，或如权利要求5所述的方法构建得到的整合型质粒载体分别接合转移导入受体菌茂源链霉菌IPIO中进行位点特异性重组获得所述菌株。