[发明专利]一种鉴定赭鹿花菌的引物组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种鉴定赭鹿花菌(Gyromitra infula)的引物组，其特征在于，所述引物组包括：正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物F2、反向内引物B2、正向内引物F1c、反向内引物B1c和环引物LB；

所述正向外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述反向外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述正向内引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述反向内引物B2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述正向内引物F1c的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述反向内引物B1c的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述环引物LB的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

2.一种鉴定赭鹿花菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组。

3.权利要求1所述引物组或权利要求2所述试剂盒在鉴定待测样品是否含有赭鹿花菌中的应用。

4.一种鉴定待测样品是否含有赭鹿花菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

以待测样品的基因组DNA为模板，利用权利要求2～3任一项所述试剂盒进行LAMP反应；

若得到扩增产物，则待测样品中含有赭鹿花菌；若未得到扩增产物，则待测样品中不含有赭鹿花菌。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述扩增产物的判断方法包括pH指示法；

当pH指示剂为酚红时，则鉴定结果为：若反应结果为黄色，则待测样品含有赭鹿花菌；若反应结果为粉红色或红色，则待测样品不含赭鹿花菌。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述LAMP反应的体系以10μL计，包括5μL 2×LAMP预混液，3μL引物混合液，2μL DNA模板和余量ddH₂O。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述引物混合液中不同引物的浓度为：

正向外引物F3和反向外引物B3的浓度分别为0.6μmol/L；

正向内引物F2、反向内引物B2、正向内引物F1c和反向内引物B1c的浓度分别为4.8μmol/L；

环引物LB的浓度为2μmol/L。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述LAMP反应的温度为65℃；所述LAMP反应的时间为60～90min。