[发明专利]桃色欧文氏菌粉色素的提纯工艺及其应用

说明书

本发明提供一种桃色欧文氏菌粉色素的提纯工艺及其应用，通过以下步骤，供试菌株的选取；供试培养基的选择；桃色欧文氏菌粉色素的制备；粉色素的提取纯化；粉色素的波长扫描；粉色素稳定性测试；粉色素对病原真菌的抑制性测试，为粉色素的提纯以及稳定性能的确定提供了理论型的依据，同时对土传病原的抑制实验，给粉色素的抑菌功能提供了准确的实验数据。

技术领域

本发明涉及粉色素提纯以及粉色素对土传病原真菌作用效果领域，尤其涉及一种桃色欧文氏菌粉色素的提纯工艺及其应用。

背景技术

随着可持续发展理念的深入，绿色农业的兴起，植物土传病害的生物防治措施已越来越受人们的关注。土传病害是由生活在土壤中的病原菌以土为媒介从植物根部或茎部侵害植物的病害。常见的土传病原菌有尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、疫霉、腐霉和大丽轮枝菌等，由这些病原菌引起的枯萎病、根腐病、早疫病和青枯病等毁灭性病害严重者会使得作物减产60％以上甚至绝收。

目前，农业生产中对于土传病害的防控手段应用最为广泛的是栽培抗病品种和使用化学杀菌剂，但是抗病品种培养周期长且不能消除土壤富集病原菌的威胁，杀菌剂虽具备成本低、使用方便等特点，但近年来人们对食品安全和环境的日益重视，使得更绿色环保且无药剂残留的生物防治方法成为国内外研究热点。研究指出，用生物防治的措施在土壤中接种人工选育的拮抗菌和促生菌，或对植物施用一些菌株的发酵产物或代谢物质，可以有效降低土传病害的发生率，提高作物产量。

因此，在菌株的次生代谢产物中挖掘相关物质已成为研究病害防治的重要手段之一，其中桃色欧文氏菌粉色素由于对土传染病具有很好的拮抗效果，所以研究桃色欧文氏菌粉色素的有效提纯方法以及具体对各类土传病原真菌的拮抗效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种桃色欧文氏菌粉色素的提纯工艺及其应用，以解决上述技术问题

为解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种桃色欧文氏菌粉色素的提纯工艺及其应用，其特征在于：包括如下步骤：

1)供试菌株的选取，包括:

分离自紫花苜蓿种子的桃色欧文氏菌(Cp₂)和番茄早疫病菌、油菜菌核病菌、马铃薯丝核病菌、黄瓜枯萎病菌及苜蓿根腐病菌5种真菌；

2)供试培养基的选择,包括：

营养琼脂培养基(NA)：牛肉膏，3g；蛋白胨，10g；NaCl，5g；水， 1000mL；琼脂，15-20g，以用于Cp₂菌株的培养和短期保存；

King’s B培养基：蛋白胨，20g；K₂HPO₄，1.15g；MgSO₄·7H₂O，1.5g；甘油，10mL；水，1000mL；琼脂，15-20g，用于Cp₂粉色素的培养与富集；

马铃薯葡萄糖培养基(PDA)：土豆，200g；葡萄糖，20g；琼脂，15-20 g；以用于病原真菌的培养及对照；

粉色素PDA培养基(PPPDA)：在PDA培养基的基础上加入体积比为20％的粉色素(OD₃₄₀＝0.785)提取液,以用于5种病原真菌的抑菌活性研究；

3)桃色欧文氏菌粉色素的制备；

4)粉色素的提取纯化；

5)粉色素的波长扫描；

6)粉色素稳定性测试；

7)粉色素对病原真菌的抑制性测试。

优选的，步骤2)中，所述营养琼脂培养基和King’s B培养基PH值选择 7.0-7.2，同时在121℃灭菌20min，所述PDA培养基的PH值为自然状态下PH，同时在121℃下灭菌20min。