[发明专利]一种抗新冠抗体药物的核心序列

说明书

一种抗新冠抗体药物的核心序列。本发明获得了全新的抗新冠病毒S蛋白RBD单克隆抗体的核心序列，与现有技术抗新冠单抗的重链和轻链序列均完全不同。经实验证实，具有本发明公开的抗新冠病毒S蛋白RBD核心序列的单克隆抗体与新冠病毒S蛋白RBD及其突变体均具有高亲和力，可有效抑制新冠病毒S蛋白RBD及其突变体与ACE2的结合，对于新冠假病毒及其突变株假病毒均有明显的中和活性，可用于制备抗新冠病毒抗体药物。

技术领域：

本发明涉及抗体药物制备，特别涉及一种抗新冠抗体药物的核心序列。

背景技术：

抗病毒单克隆抗体特异性的分子基础主要来自于它重链和轻链的高度可变区CDR1、CDR2和CDR3，这些区域是与抗原结合的关键部位。

因此获得单克隆抗体的重链和轻链的CDR1、CDR2和CDR3的序列，是制备抗体药物的关键。因为除了此核心区域外，抗体序列的其它位置都是框架区。在CDR区序列不变以及和抗原结合所需的三维结构不受影响的条件下，对框架区进行适当的突变，可以在不影响抗体的药物活性的同时减弱其免疫原性、提高亲和力从而提高抗体的治疗效果和安全性。

无论何种形式单克隆抗体，包括具有所需特异性的结合结构域的任意特异性结合因子，可以是单价的或是单链抗体、双链抗体、嵌合抗体以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。其重链和轻链中的高度可变区CDR1、CDR2和CDR3的序列都是制备抗体的核心和基础。

已知SARS-CoV-2的S蛋白是通过受体结合结构域(RBD)与宿主受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，介导病毒进入宿主细胞。S蛋白所包含两个功能性亚基S1和S2中，S1负责与宿主细胞受体结合。S1由N端结构域(NTD)和受体结合结构域(RBD)组成，对决定组织嗜性和宿主范围至关重要。因此，提供可以有效与ACE2竞争结合的单克隆抗体的高度可变区CDR1、CDR2和CDR3的核心序列，有望制备治疗新型冠状病毒相关疾病的药物。

发明内容

本发明的目的是制备治疗新型冠状病毒相关疾病的药物，具体是提供可以有效与ACE2竞争结合的单克隆抗体的核心序列。

以下所称新冠病毒S蛋白RBD指SARS-CoV-2(COVID-19)S protein RBD。

本发明获得了全新的抗新冠病毒S蛋白RBD单克隆抗体的核心序列，与现有技术抗抗新冠病毒单克隆抗体的重链和轻链序列均完全不同。

本发明提供的抗新冠病毒S蛋白RBD单克隆抗体的核心序列，重链和轻链的CDR1、CDR2和CDR3分别是如下所示氨基酸序列的多肽：

重链：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3；

轻链：SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；

根据上述抗新冠病毒S蛋白RBD单克隆抗体的核心序列可以制备有效抑制新冠病毒S蛋白RBD及其突变体的抗体药物。

具体的，本发明通过如下手段得到了上述抗新冠病毒S蛋白RBD单克隆抗体的核心序列：

A新冠病毒S蛋白RBD蛋白作为抗原以30μg/只免疫BALB/C小鼠，三周后同样剂量加强免疫；

B ELISA法测定免疫后小鼠血清中的抗体滴度，达到理想效果后以50μg剂量冲击免疫；

C取免疫成功的小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行电融合，待细胞长成细胞团后进行上清滴度检测，通过三轮亚克隆获得阳性单克隆细胞株；

D单克隆细胞株扩大培养后进行小鼠腹腔注射制备腹水，并从收集的腹水纯化得到相应的抗体；

E利用SPR技术进行单克隆抗体的亲和动力学测定；