[发明专利]一对对PrP106-126

说明书

本发明公开了一种一对对PrP_106‑126聚集有抑制作用的手性氨基酸修饰的磷脂分子,具体应用方式为将手性氨基酸修饰的磷脂分子加工成单层手性磷脂囊泡，与PrP_106‑126单体和寡聚体共同孵育，然后使用全功能微孔板检测仪观察PrP_106‑126的聚集和纤维化情况。此手性磷脂不仅具有良好的生物相容性，并且对PrP_106‑126单体和寡聚体的聚集和纤维化也有显著的抑制效果。

技术领域

本发明涉及生物化学和分析技术领域。具体涉及一对对PrP_106-126聚集有抑制作用的的手性磷脂。

背景技术

朊蛋白是一种同时可以在动物和人类中引起中枢神经系统变性的具有传染性的蛋白颗粒，由于其具有较长的潜伏期和较高的致死率，使得公共疾病的防控变得异常艰难。最新的研究表明朊蛋白疾病的致病机理同样适用于其他神经退行性疾病，如阿兹海默等。朊蛋白疾病的主要病理特征是正常的PrP^C转变为错误折叠的PrP^Sc,其中PrP_106-126被证实是朊蛋白疾病发生很重要的一个片段。因此，抑制PrP_106-126错误折叠或聚集是解决这类朊蛋白病的关键所在。

越来越多的证据表明，细胞膜表面的组分是引起疾病的关键。细胞膜是由磷脂双分子层组成的，表面有很多手性氨基酸，因此研究磷脂的分子手性对抑制PrP_106-126聚集的影响是必要的。

发明内容

本发明发现手性磷脂囊泡能够强烈抑制与朊蛋白疾病密切相关的PrP_106-126单体和寡聚体的聚集和纤维化过程，该对手性磷脂分子可被用于预防和治疗朊蛋白疾病。

本发明目的采用下述方案来实现：

一对对PrP_106-126聚集有抑制作用的手性氨基酸修饰的磷脂分子,手性氨基酸修饰的磷脂分子具有如下分子结构：

将手性氨基酸修饰的磷脂分子加工成单层手性磷脂囊泡，与PrP_106-126单体和寡聚体共同孵育，然后使用全功能微孔板检测仪观察PrP_106-126的聚集和纤维化情况；具体操作过程如下

(1)将手性氨基酸修饰的磷脂分子与未修饰的磷脂分子在烧瓶中混合，溶于三氯甲烷和甲醇的混合溶液，超声至完全溶解后用旋转蒸发仪除去三氯甲烷和甲醇，在烧瓶底部形成一层透明薄膜，之后向烧瓶中加入缓冲液使干燥的脂质膜再水化，得到多层囊泡悬浮液，将多层囊泡悬浮液通过小型挤出机挤出，得到单层手性磷脂囊泡；

(2)将PrP_106-126多肽粉末溶解在1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇中，震荡后用氮气吹干溶液，之后将PrP_106-126重新溶解在水中，并用缓冲液稀释至所需浓度，得到PrP_106-126单体，单体在37℃孵育24h-48h成为寡聚体；

(3)将单层手性磷脂囊泡与PrP_106-126单体和寡聚体共同孵育，并加入荧光分子硫黄素T，加注于96孔板中，通过全功能微孔板检测仪观察PrP_106-126单体的聚集和纤维化情况。

步骤1)中手性氨基酸修饰的磷脂分子与未修饰的磷脂分子的质量比为1：1三氯甲烷和甲醇的体积比为2：1，缓冲液为浓度为150nM的NaCl缓冲溶液中，其中所述溶剂为去离子水，水化温度为70℃并不断搅拌，单层手性磷脂囊泡浓度为1mg/mL，挤出机的滤膜尺寸为100nm，并循环挤出20-30次。