[发明专利]一种同时检测饲料中九种有机酸含量的方法

权利要求书

1.一种同时检测饲料中九种有机酸含量的方法，其特征是，包括如下步骤：

（1）对饲料样品进行预处理得到待测液；预处理方法为：将称取好的饲料样品置于离心管中，加入水摇匀后超声提取，然后离心分离，转移上清液后向残渣中加水再提取两次，合并三次提取得到的上清液并定容，得到待测液；饲料样品与三次提取时加入的水的添加量之比为0.1g:35~45mL:10~20mL:10~20mL；饲料样品与待测液的质量体积比为0.1g:100~150mL；

（2）配制九种有机酸的标准溶液；九种有机酸为：草酸、酒石酸、苹果酸、乙酸、乳酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、富马酸；

（3）用高效液相色谱仪对标准溶液进行检测，得到标准曲线；然后对待测液进行检测，通过外标法计算待测液中的九种有机酸的含量；检测时采用的流动相由体积比为5~6:95~94的甲醇和质量浓度为0.04~0.06%的磷酸水溶液组成；检测条件为：柱温25~35℃；流速0.75~0.85mL/min；进样量10.0~10.2μL；检测波长214nm；

使用的色谱柱的固定相为季铵盐和氨基改性硅胶，其制备方法为：

A）将N,N-二甲基苄胺加入无水乙醇中，搅拌均匀后加热至75~85℃，搅拌状态下向溶液中滴加γ-氯丙基三甲氧基硅烷，75~85℃回流反应36~48h后得到硅烷改性季铵盐；

B）将硅胶颗粒用2~4mol/L的盐酸溶液回流6~10h，过滤、洗涤、干燥后得到活化后的硅胶颗粒；

C）将活化后的硅胶颗粒分散在干燥的甲苯中，然后加入硅烷改性季铵盐及γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷，搅拌均匀后氮气保护下回流反应24~36h，将产物过滤、洗涤、干燥后得到季铵盐和环氧基改性硅胶；

D）将季铵盐和环氧基改性硅胶分散在无水乙醇中，然后加入季戊四胺，氮气保护下搅拌反应60~72h，将产物过滤、洗涤、干燥后得到所述季铵盐和氨基改性硅胶。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测饲料中九种有机酸含量的方法，其特征是，超声提取时间10~15min；离心分离时的转速2000~4000r/min，离心时间5~10min。

3.根据权利要求1所述的一种同时检测饲料中九种有机酸含量的方法，其特征是，步骤（2）所述的标准溶液中九种有机酸的浓度范围为20~200μg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测饲料中九种有机酸含量的方法，其特征是，步骤（3）中使用的色谱柱内径为4.5~5mm，长度200~250mm。

5.根据权利要求1所述的一种同时检测饲料中九种有机酸含量的方法，其特征是，步骤A）中N,N-二甲基苄胺与γ-氯丙基三甲氧基硅烷的摩尔比为1:1~1.2。

6.根据权利要求1所述的一种同时检测饲料中九种有机酸含量的方法，其特征是，步骤C）中硅胶颗粒、硅烷改性季铵盐、γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷的添加量之比为1g:0.5~0.7mL:0.3~0.5mL。

7.根据权利要求1所述的一种同时检测饲料中九种有机酸含量的方法，其特征是，步骤D）中季铵盐和环氧基改性硅胶与季戊四胺的质量比为1:0.2~0.3。