[发明专利]一种青春双歧杆菌及其筛选、培养方法和应用

说明书

本发明公开了一种青春双歧杆菌及其筛选、培养方法和应用，所述青春双歧杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，名称为Bifidobacterium adolescentis JK‑BIF‑BIF‑001‑02‑B1，菌株保藏编号为：GDMCC No：62063。该青春双歧杆菌的溶胞产物可提高人成纤维细胞的活力和数量，具有很好的抗衰老功效。本发明还提供了一种青春双歧杆菌的发酵培养方法，通过采用特定氮源和生长因子的发酵培养基、并对其工业发酵工艺条件进行优化后，大大提高了菌体得率，使青春双歧杆菌工业水平的菌体得率达到3％以上。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种青春双歧杆菌及其筛选、培养方法和应用。

背景技术

皮肤是人体的第一道防线，担负抵御外界侵入，防止水分流失的职责；同时也是人体生理状态、病理状态的显示屏。当机体衰老时皮肤可表现为表皮干燥粗糙，肌肤松弛，皱纹增多、加深，缺乏弹性，皮肤色素沉着等；其根本机制是皮肤成纤维细胞的损伤、老化。进而导致胶原蛋白含量减少，弹性蛋白变性。

皮肤的表皮层、真皮层以及皮肤附属器的组织均会随着机体年龄的增长而发生相应改变，但最具有特征性的变化还是真皮层成分的变化。真皮层成分变化的内因是成纤维细胞衰老。成纤维细胞负责合成真皮中的结构性成分胶原纤维、网状纤维、弹性纤维以及氨基多糖和蛋白多糖等基质，其中以胶原纤维的含量最为丰富。皮肤老化过程中，胶原蛋白含量逐渐降低，真皮层厚度变薄；弹性纤维变性、减少，失去弹性、张力。

青春双歧杆菌是一类严格厌氧的益生菌，其来源主要是人、动物肠道和牛瘤胃等活体部位。其溶胞产物对皮肤的抗衰作用已有较多的文献报道，如专利文献CN112708581A中记载了一种青春双歧杆菌DH162及其发酵产物、应用，专利文献CN113521111A中记载了青春双歧杆菌在衰老延缓防霉的应用。

然而，青春双歧杆菌在进行工业生产时，其对生长条件要求较为苛刻，目前的发酵培养所获得的菌体浓度和菌体得率都较低(目前青春双歧杆菌工业水平的菌体得率约2.5％)，如何提高菌体得率是一项一直在进行的研究。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种青春双歧杆菌及其筛选、培养方法和应用。本发明提供的一株青春双歧杆菌的溶胞产物可提高人成纤维细胞的活力和数量，具有很好的抗衰老功效。本发明还通过采用特定氮源和生长因子的发酵培养基、并对其工业发酵工艺条件进行优化后，大大提高了菌体得率，使青春双歧杆菌工业水平的菌体得率达到3％以上。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

第一方面，本发明提供了一种青春双歧杆菌，所述青春双歧杆菌所述青春双歧杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，名称为Bifidobacterium adolescentis JK-BIF-BIF-001-02-B1，菌株保藏编号为：GDMCC No：62063。

第二方面，本发明提供了一种青春双歧杆菌的筛选方法，包括以下步骤：

A、将人肠道内容物稀释后加入筛选培养基中进行厌氧条件下培养；

B、挑取生长出的单菌落进行革兰氏染色，选取革兰氏阳性和具有双歧杆菌形态特征的菌株；

C、将步骤B选取的菌株接种到MRS液体培养基中培养，将螺旋生长于培养基底部的菌株进行需氧与厌氧条件下培养，选取只在厌氧条件下生长的菌株；

D、将步骤C选取的菌株进行过氧化氢酶检验，选取结果为阴性的菌株；

E、将步骤D选取的菌株的代谢产物进行乳酸和乙酸的检测，选取乙酸质量浓度大于乳酸质量浓度的菌株；

F、将步骤E选取的菌株进行16S rRNA的鉴定，获得青春双歧杆菌菌株。