[发明专利]一种气密条件下病原核酸的检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种气密条件下病原核酸的检测试剂盒及检测方法，属于核酸提取技术领域，包括密封盒体、密封盖，密封盒体内从上至下依次设置有由通道连接的第一洗涤剂室、裂解缓冲剂室、第二洗涤剂室、洗脱缓冲剂室、纯化膜室、废液室、反应检测室和在通道上设置的能够开通的密封膜；检测方法包括裂解缓冲剂室、第一洗涤剂室、第二洗涤剂室和洗脱缓冲剂室以密封膜与通道隔离，相应步骤完成以后，激光击穿密封膜，离心驱动相应腔室液体流入通道。本发明通过密封膜隔离预装试剂，完全无接触的激光打孔和离心力驱动，基于流体性质的芯片结构设计，实现检测试剂盒在气密全封闭条件下病原核酸的提取和实时荧光PCR扩增检测。

技术领域

本发明涉及核酸提取技术领域，尤其是一种气密条件下病原核酸的检测试剂盒及检测方法。

背景技术

核酸分析技术，作为一种强有力的分子诊断技术，在病原体诊断、传染病预防、疾病监测治疗等方面具有重要的应用。相对于常规的免疫学诊断方法,核酸分析具有高特异性、高灵敏度等突出优势。由于大多数目标基因的浓度低,难以直接分析检测,所以基于核酸扩增原理的PCR、LAMP等核酸分析方法成为了当前核酸分析的主要手段。其完整过程通常包括核酸提取、核酸扩增以及核酸检测三大环节。但传统的核酸分析存在耗时长、成本高、工作量大、设备体积大、需要专门的实验环境和人员等缺点,并且由于核酸扩增的超高灵敏度,在普通实验室开放环境下核酸的扩增过程中,阳性样本的气溶胶交叉污染很容易造成后续样品的核酸检测假阳性。因此对样品在全密闭条件下，进行无交叉污染的自动化核酸扩增分析具有十分重要的应用价值。

目前申请号为202020441774.9的中国实用新型专利公开了一站式全自动封闭式核酸提取与实时荧光PCR测试联合试剂盒。所述联合试剂盒为一体结构，包括加样口A、裂解室(C1)、吸附及洗脱室(C2)、废液室(C3)、洗脱剂室(C4)、荧光PCR室(C5)和切换阀(VT1),连通各个腔室的管道以及控制流体流向的单向阀，维持压力平衡的通气阀,驱动液体流动的活塞(PT)，磁珠。

但是该专利存在以下局限：

1、联合试剂盒的废液室C3的顶端设置有维持腔体内压力平衡的单向通气阀V7，洗脱剂室C4的顶端设置有维持腔体内压力平衡的单向通气阀V8；洗脱剂室C4和荧光PCR室C5之间设置有连通管道，且该连通管道上设置有单向通气阀V5，用于维持荧光PCR室内部压力平衡。由此可见，该专利并没有实现真正的“封闭式”，依然存在产生气溶胶污染，导致生物泄露和样品交叉污染的风险。

2、联合试剂盒标注为注塑成型的一体结构。但VT1切换阀处无法实现密封和一次性注塑工艺成型，因此会存在泄漏风险。

3、联合试剂盒的吸附及洗脱室C2中预存有用于吸附核酸的磁珠。由此可见，吸附核酸的磁珠的生产工艺决定无法实现“无核酸污染”，该种核酸提取纯化方法不适用于高灵敏病毒核酸检测，存在假阳性风险。

4、荧光PCR室C5采用恒温热板PCR反应技术，灵敏度低。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种气密条件下病原核酸的检测试剂盒及检测方法，实现检测试剂盒在气密全封闭条件下病原核酸的提取。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种气密条件下病原核酸的检测试剂盒，包括设置有样品入口的密封盒体、设置在样品入口处的密封盖，所述密封盒体内从上至下依次设置有由通道连接的填充有第一洗涤剂的第一洗涤剂室、上端与样品入口连接且填充有裂解缓冲剂的裂解缓冲剂室、填充有第二洗涤剂的第二洗涤剂室、填充有洗脱缓冲剂的洗脱缓冲剂室、将样品进行提纯的纯化膜室、储存废液的废液室和填充有扩增混合物的反应检测室；

所述第一洗涤剂室、所述第二洗涤剂室、所述裂解缓冲剂室和所述洗脱缓冲剂室的左侧均设置有与通道连通的出口端，且出口端在使用前进行封闭设置；

所述纯化膜室由通道贯穿，且在纯化膜室的出口端设置纯化膜；