[发明专利]一种须鳗虾虎鱼多态性微卫星分子标记及其引物对和应用

说明书

本发明属于入侵物种种群遗传学DNA分子标记技术领域，本发明提供了一种须鳗虾虎鱼多态性微卫星分子标记及其引物对和应用。本发明通过构建须鳗虾虎鱼简化基因组文库，进行高通量测序，对基因组中的微卫星位点进行筛选，对其中的14个位点进行大样本种群的多态性实验验证。首次筛选得到了14个多态性微卫星标记，包括10个高度多态性标记和4个中度多态性标记。本发明为须鳗虾虎鱼入侵种群遗传学的研究提供分子技术支持，有助于对其进行入侵种群来源、入侵路径的回溯研究。

技术领域

本发明涉及入侵物种种群遗传学DNA分子标记技术领域，尤其涉及一种须鳗虾虎鱼多态性微卫星分子标记及其引物对和应用。

背景技术

须鳗虾虎鱼Taenioides cirratus，也称灰盲条鱼，隶属于鲈形目Perciformes 虾虎鱼科Gobiidae鳗虾虎鱼属Taenioides。该鱼作为肉食性鱼类，繁殖力大且初次性成熟年龄小，能够在新环境中快速建立自我繁衍的入侵种群；目前已入侵我国内陆多个大型湖泊，被报道造成湖泊小型鱼虾资源量的急剧下降 (Liang Y,Fang T,Li J,Yang K,Zhao X.X,Cui K,and Lu W.X,Age,growth and reproductive traits of invasive gobyTaenioides cirratus in the Chaohu Lake,China.JAppl Ichthyol,2020,36(2):219–226)。在20世纪80年代，该鱼在高邮湖偶见，2000年后，资源量显著增加，成为湖泊常见种；随后，分别于 2005年和2011年在骆马湖和南四湖下级湖出现，2014年扩散到南四湖上级湖(Qin J,Cheng F,Zhang L,SchmidtB.V,LiuJ,Xie S.G,Invasions oftwo estuarinegobiid species interactively induced from water diversion and saltwaterintrusion.Manag Biol Invasion,2019,10(1):139–150)；2012年在巢湖出现。须鳗虾虎鱼湖泊入侵种群的规模大，有增加、爆发甚至进一步扩散的风险，对湖泊生态系统的结构和功能完整性的破坏力大。因此，急需开展入侵种群的来源地、入侵路径等方面研究，进而科学合理制定入侵鱼类的防控对策。

针对入侵物种种群来源地和入侵路径模糊的问题，利用分子标记反应出的种群内和种群间遗传上的亲缘关系的种群遗传学方法，能够对上述问题进行准确回溯，已在国内外众多入侵物种中得到应用与证实。微卫星 (Microsatellite),又被称为简单序列重复(Simple sequence repeat，SSR)或短串联序列重复(shorttandemrepeat，STR)，由核心序列及其两端的侧翼序列构成，广泛存在于真核生物基因组中，具有共显性遗传、多态性广、分布广、易于检测的特点，是当前入侵物种种群来源地和入侵路径研究中应用最广的分子标记。为了快速有效的鉴别须鳗虾虎鱼不同湖泊入侵种群的来源地及其入侵路径，对其微卫星引物的开发尤为重要。目前，须鳗虾虎鱼的微卫星标记分子还未得到开发应用。

发明内容

为克服现有技术中存在的上述缺陷，本发明通过构建须鳗虾虎鱼简化基因组文库，进行高通量测序，对基因组中的微卫星位点进行筛选，提供了一种须鳗虾虎鱼多态性微卫星分子标记及其引物对和应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种须鳗虾虎鱼多态性微卫星分子标记，包含14个须鳗虾虎鱼多态性微卫星分子标记位点，所述分子标记位点为TC144、TC145、 TC176、TC208、TC220、TC119、TC149、TC155、TC203、TC13、TC35、 TC33、TC37和TC48。

本发明还提供了一种须鳗虾虎鱼多态性微卫星分子标记的引物对，

所述TC144的正反引物分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；