[发明专利]两株降解生物胺的野生酵母及其在果酒酿造中的应用

权利要求书

1.一株酿酒酵母，其特征在于，其保藏编号为CGMCC No.23505。

2.一株葡萄汁有孢汉逊酵母，其特征在于，其保藏编号为CGMCC No.23505。

3.权利要求1所述的酿酒酵母和/或权利要求2所述的葡萄汁有孢汉逊酵母在降低葡萄酒、桑椹酒、蓝莓酒等果酒发酵过程中色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺含量的应用。

4.一种生产果酒的方法，其特征在于，利用如权利要求1所述的酿酒酵母和2所述的葡萄汁有孢汉逊酵母通过单菌株/顺序接种发酵果实原料，得到低生物胺含量的果酒。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述果实为葡萄、桑葚、蓝莓、蓝靛、樱桃、越橘、红树莓、山楂或草莓中至少一种。

6.一种高通量筛选具有高生物胺降解特征的酵母的方法，其特征在于，可得到如权利要求1所述酿酒酵母或权利要求2所述的和葡萄汁有孢汉逊酵母，包括以下步骤：

(1)取出在甘油管中冻存的菌株，解冻后按照10％的比例接种于液体YPD培养基中，28℃，160rpm培养12h，使用接种环蘸取少量菌液在WL鉴别培养基上进行平板划线，划线完成的平板在28℃静置培养48h；

(2)若WL平板上没有出现杂菌，则用接种环挑取WL平板上的目标单菌落接种到液体YPD培养基中培养12h，然后用0.9％生理盐水调整其菌液浓度OD600＝1.0进行后续试验，否则应该重复上述平板划线的操作，直到使菌株纯化为止；

(3)向15mL离心管中添加适量生物胺降解菌株筛选培养基，将(2)所得已调整浓度的菌液接种到离心管中，接种量为10％，每种菌液接种3个离心管作为平行试验，记录好每个离心管所对应的单菌落编号，将离心管置于28℃恒温培养箱中培养72h；

(5)将培养完成后的菌液在4℃、12000rpm的高速离心机中离心10min，取上清液并经过0.22μm滤膜过滤，用超高效液相色谱检测经过滤后菌液中8种生物胺的浓度，从而对不同菌株的生物胺降解能力进行评价，以不添加酵母的筛选培养基为对照，筛选出具有较高生物胺降解活力的特征菌株。