[发明专利]一种可招募内源性间充质干细胞的支架材料及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种可招募内源性间充质干细胞的支架材料，其特征在于，该支架材料是由巯基化透明质酸与多巴胺改性的丝素蛋白交联形成的具有复合三维网络结构的水凝胶在冷冻干燥后形成的冻干海绵支架依次经马来酰亚胺聚乙二醇活性酯溶液和一端连接半胱氨酸的E7肽的溶液浸泡处理，将E7肽经马来酰亚胺聚乙二醇活性酯接枝在冻干海绵支架上之后经干燥形成的，该支架材料具有相互贯通的三维多孔结构；

所述具有复合三维网络结构的水凝胶由巯基化透明质酸氧化自交联、多巴胺改性的丝素蛋白氧化自交联，以及巯基化透明质酸的巯基与多巴胺改性的丝素蛋白的邻苯二酚基团通过迈克加成反应形成；所述巯基化透明质酸的结构如式(I)所示，巯基化透明质酸中半胱氨的接枝率为5％～65％；所述多巴胺改性的丝素蛋白中多巴胺的接枝率为5％～60％；

2.根据权利要求1所述可招募内源性间充质干细胞的支架材料，其特征在于，冻干海绵支架在马来酰亚胺聚乙二醇活性酯溶液浸泡的过程中，马来酰亚胺聚乙二醇活性酯的N-羟基琥珀酰亚胺活性酯与冻干海绵支架的氨基反应而接枝在冻干海绵支架上；在一端连接半胱氨酸的E7肽的溶液浸泡的过程中，E7肽一端连接的半胱氨酸的巯基与马来酰亚胺聚乙二醇活性酯的马来酰亚胺基团反应而将E7肽接枝在冻干海绵支架上。

3.根据权利要求1所述可招募内源性间充质干细胞的支架材料，其特征在于，所述冻干海绵支架中，巯基化透明质酸与多巴胺改性的丝素蛋白的质量比为(0.25～4):1。

4.根据权利要求1所述可招募内源性间充质干细胞的支架材料，其特征在于，接枝在冻干海绵支架上的E7肽在支架材料中的含量为0.05wt.％～10wt.％。

5.根据权利要求1所述可招募内源性间充质干细胞的支架材料，其特征在于，多巴胺改性的丝素蛋白的制备方法如下：

将脱除丝胶、清洗并干燥后的蚕茧浸没于浓度为8～10mol/L的LiBr溶解0.5～6h，然后用水充分透析，向所得丝素蛋白溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，在pH值为4～5的条件下活化1～2h，然后加入盐酸多巴胺反应8～24h，用水充分透析，得到多巴胺改性的丝素蛋白；

丝素蛋白、N-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐与盐酸多巴胺的摩尔比为1:(0.2～2):(1.5～6):(5～10)。

6.根据权利要求1所述可招募内源性间充质干细胞的支架材料，其特征在于，该支架材料的多孔结构的孔径为40～100μm。

7.权利要求1至6中任一权利要求所述可招募内源性间充质干细胞的支架材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将巯基化透明质酸溶解于去离子水中形成浓度为0.5wt.％～20wt.％的巯基化透明质酸溶液；将多巴胺改性的丝素蛋白配制成浓度为0.5wt.％～20wt.％的多巴胺改性的丝素蛋白溶液；

(2)将巯基化透明质酸溶液与多巴胺改性的丝素蛋白溶液按照(1～15):(1～15)的体积比混合均匀，调节pH值至7.0～8.0，注入模具中，在34～40℃静置形成复合水凝胶，将复合水凝胶冷冻干燥，得到冻干海绵支架；

(3)将冻干海绵支架置于浓度为0.1～5mg/mL、pH为7～9的马来酰亚胺聚乙二醇活性酯溶液中充分浸泡，然后取出置于浓度为0.01～0.5mg/mL、pH为5.5～7.5的一端连接半胱氨酸的E7肽的溶液中在2～7℃充分浸泡，取出，充分清洗，干燥，即得可招募内源性间充质干细胞的支架材料。

8.根据权利要求7所述可招募内源性间充质干细胞的支架材料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将冻干海绵支架置于马来酰亚胺聚乙二醇活性酯溶液中浸泡0.5～2h，然后取出置于一端连接半胱氨酸的E7肽的溶液中在2～7℃浸泡18～26h，取出，充分清洗，干燥，即得可招募内源性间充质干细胞的支架材料。