[发明专利]一种可视化快速检测中华鳖出血综合症病毒TSHSV的RT-RPA试剂盒、引物及探针

权利要求书

1.一种可视化快速检测中华鳖出血综合症病毒TSHSV的RT-RPA试剂盒，其特症在于，所述试剂盒包括：

含RPA冻干粉的干粉反应管；

缓冲液A，缓冲液B，引物，胶体金探针，胶体金试纸条；

所述胶体金探针为TSHSV-nfo-PB，其序列为[5’-6FAM]TCTTGTGCTGGATGTTGGCGAATTCTTGGCCT[THF]GAACCAGTATACTGT[C3spacer-3’]。

2.一种可视化快速检测中华鳖出血综合症病毒TSHSV的RT-RPA试剂盒，其特症在于，所述试剂盒包括：

含RPA冻干粉的干粉反应管；

缓冲液A，缓冲液B，引物，荧光探针，所述荧光探针为TSHSV-exo-PB，

其序列为：5’-TCTTGGCCTTGAACCAGTATACTGTTACAAA[FAM-dT]A[THF][BHQ-dT]GACGTTTGCTTTGCT[C3spacer-3’]。

3.根据权利要求1或2所述的RT-RPA试剂盒，其特症在于，所述引物的序列为：

上游引物TSHSV-F2：5’-AAGCTTCCAGCCTATTGGCCTCCATTTACC-3’

下游引物TSHSV-R1：[5’-biotin]AATTGTCTTCCCAACATACTCACTTCCGTTG-3’。

4.根据权利要求1或2所述的RT-RPA试剂盒，其特症在于，所述引物的序列为：

上游引物TSHSV-F4：5’-TTGTTGAGCAAGACCACCAAGGACGACCCT-3’

下游引物TSHSV-R2：[5’-biotin]AATCTCAGAGGTCAGCTTCTCAATAGTTTTG-3’。

5.根据权利要求1或2所述的RT-RPA试剂盒，其特症在于，反应体系组成如下：

向干粉反应管内加入缓冲液A 29.4μL，上游引物2μL，下游引物2μL，探针0.6μL，ddH₂O11.5μL，核酸模板2μL及缓冲液B 2.5μL，总体积50μL；

上游引物、下游引物和探针的浓度均为10μM。

6.根据权利要求1或2所述的RT-RPA试剂盒，其特症在于，所述缓冲液A的组成为：6wt％的聚乙二醇，Tris-HCL 30mM，ddH₂O余量。

7.根据权利要求1或2所述的RT-RPA试剂盒，其特症在于，所述缓冲液B为浓度280mM的醋酸镁溶液。

8.根据权利要求1或2所述的RT-RPA试剂盒，其特症在于，所述RPA冻干粉包括重组酶、单链DNA结合蛋白、DNA聚合酶、辅助蛋白和M-MLV逆转录酶。

9.一种可视化快速检测中华鳖出血综合症病毒TSHSV的引物和探针，其特症在于，所述探针为胶体金探针TSHSV-nfo-PB，其序列为[5’-6FAM]TCTTGTGCTGGATGTTGGCGAATTCTTGGCCT[THF]GAACCAGTATACTGT[C3spacer-3’]；

所述引物为：

上游引物TSHSV-F2：5’-AAGCTTCCAGCCTATTGGCCTCCATTTACC-3’

下游引物TSHSV-R1：[5’-biotin]AATTGTCTTCCCAACATACTCACTTCCGTTG-3’；

或所述引物为：

上游引物TSHSV-F4：5’-TTGTTGAGCAAGACCACCAAGGACGACCCT-3’

下游引物TSHSV-R2：[5’-biotin]AATCTCAGAGGTCAGCTTCTCAATAGTTTTG-3’。

10.一种可视化快速检测中华鳖出血综合症病毒TSHSV的引物和探针，其特症在于，所述探针为荧光探针TSHSV-exo-PB，

其序列为：5’-TCTTGGCCTTGAACCAGTATACTGTTACAAA[FAM-dT]A[THF][BHQ-dT]GACGTTTGCTTTGCT[C3spacer-3’]；

所述引物为：

上游引物TSHSV-F2：5’-AAGCTTCCAGCCTATTGGCCTCCATTTACC-3’

下游引物TSHSV-R1：[5’-biotin]AATTGTCTTCCCAACATACTCACTTCCGTTG-3’；

或所述引物为：

上游引物TSHSV-F4：5’-TTGTTGAGCAAGACCACCAAGGACGACCCT-3’

下游引物TSHSV-R2：[5’-biotin]AATCTCAGAGGTCAGCTTCTCAATAGTTTTG-3’。