[发明专利]间充质干细胞外泌体及组合物的制备和在化妆品中的应用

权利要求书

1.间充质干细胞外泌体及组合物，包括间充质干细胞外泌体和偶联多肽，其特征在于：该偶联多肽的分子结构式如下：

2.如权利要求1所述偶联多肽的制备方法，其特征在于：所述偶联多肽的制备方法包括以下步骤：

(1)使用多肽固相合成法合成TH肽；

(2)将TH肽与棕榈酰四肽-7按摩尔比1:1.2溶于甲醇溶剂中，在催化剂和惰性气体的保护作用下进行偶联，使TH肽的N端氨基与棕榈酰四肽-7的羧基端形成酰胺键相连接，制备得到TH肽与棕榈酰四肽-7偶联多肽。

3.如权利要求1所述间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：

(1)TRADD修饰间充质干细胞：构建TRADD过表达腺病毒，利用得到的TRADD过表达腺病毒转染间充质干细胞；

(2)间充质干细胞培养：用含体积浓度10％胎牛血清的低糖DMEM培养基培养3～5代步骤(1)构建TRADD过表达的间充质干细胞，待细胞融合至70％～80％时换无血清培养基培养48h，收集培养后的上清液；

(3)通过微流控技术分离间充质干细胞外泌体，并进行纯化，即得到TRADD修饰的间充质干细胞外泌体；所述间充质干细胞为脂肪间充质干细胞。

4.根据权利要求3所述的一种间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：微流控技术分离间充质干细胞外泌体主要采用微流控芯片，所述微流控芯片由PDMS(聚二甲基硅氧烷)基片和PC(聚碳酸酯)膜片组成，所述膜片上设有底盖，底盖也是PC材质，所述基片、膜片与底盖通过胶带密封贴合连接，所述膜片上设有进样口、弯形通道、微通道和出液口，其中第一进样口(4)和第二进样口(7)通过弯形通道(6)分别连接第二微通道(5)和第三微通道(8)，所述第二微通道(5)和第三微通道(8)为水平相互平行设置，所述第二微通道(5)的另一端通过出液口连接废弃槽(11)，所述第三微通道(8)的另一端通过出液口连接回收槽(9)，所述第二微通道(5)和第三微通道(8)相垂直处还设有第一微通道(3)，所述第一微通道(3)的两端处分别设有正极电泳槽(1)和负极电泳槽(2)，所述第三微通道(8)与第一微通道(3)的连接处还设有纳米孔薄膜(12)，所述纳米孔薄膜(12)的下端为富集池(10)。

5.根据权利要求4所述的一种间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述第一进样口(4)和第二进样口(7)可连接微量注射泵，泵的流速为0.1mL/h，所述第一进样口和第二进样口的孔径为0.8μm。

6.根据权利要求4所述的一种间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述第一微通道(3)的长度为55mm，宽度为5mm，深度为100μm，所述第二微通道(5)和第三微通道(8)的长度为48mm,宽度为2mm，深度为100μm，所述纳米孔薄膜(12)的大小为5mm*2mm，纳米孔薄膜(12)的孔径为30-200nm。

7.根据权利要求3所述的一种间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所制得的间充质干细胞外泌体直径在55～100nm范围内。

8.如权利要求1所述间充质干细胞外泌体及组合物在化妆品中的应用，其特征在于：含有间充质干细胞外泌体及其组合物的化妆品，包括以下组分：间充质干细胞外泌体、TH肽与棕榈酰四肽-7偶联多肽、橄榄果粉、红葡萄粉、牡丹皮提取物、乳化剂、保湿剂、增稠剂、螯合剂、余量为溶剂。

9.根据权利要求8所述间充质干细胞外泌体及组合物在化妆品中的应用，其特征在于：所述化妆品的应用包括以下用途中的一种或几种：

(1)在皮肤抗衰老、抗皱、抗氧化和修复再生类化妆品中的应用；

(2)在促进皮肤瘢痕和创面愈合类化妆品中的应用；

(3)抗过敏、抗炎症类化妆品中的应用。

10.根据权利要求8所述间充质干细胞外泌体及组合物在化妆品中的应用，其特征在于：所述化妆品的制剂可选择以下形式中的任一种：

A、以间充质干细胞外泌体作为添加剂：以所述间充质干细胞外泌体作为功效成分的添加剂；

B、冻干粉剂型：对外泌体浓缩液进行冻干休眠和冷冻干燥制备干粉剂型。