[发明专利]一种检测EGFR基因T790M和C797S突变的引物组、应用、试剂盒以及方法

说明书

本申请涉及生物学检测技术领域，尤其涉及一种检测EGFR基因T790M和C797S突变的引物组、应用、试剂盒以及方法，该引物组包括正向引物SEQ ID No:1、反向引物SEQ ID No:2和探针SEQ ID No:3～SEQ ID No:6，本申请的引物组用于检测EGFR基因T790M和C797S突变。

技术领域

本申请涉及生物学检测技术领域，尤其涉及一种检测EGFR基因T790M和C797S突变的引物组、应用、试剂盒以及方法。

背景技术

EGFR(表皮生长因子受体)是一种由EGF家族细胞外配体激活的跨膜受体。EGFR可与其他ErbB家族成员同二聚或异二聚以启动信号传导，激活下游信号通路，包括典型MAPK和PI3K/AKT/mTOR信号级联，最终导致细胞增殖、迁移和分化。在肺癌中，EGFR的激活突变导致对EGFR酪氨酸激酶抑制敏感的受体的组成性激活形式。靶向EGFR的酪氨酸激酶抑制剂，包括阿法替尼、厄洛替尼和吉非替尼被称作第一/二代抑制剂，已被批准用于非小细胞肺癌患者的一线治疗。肺癌患者在使用第一/二代抑制剂治疗10个月后，部分肺癌患者即发生第二位点耐药突变，包括Met扩增、EGFR T790M突变和KRAS/NRAS/PIK3CA/HER2等突变，其中发生频率最高的即为EGFR T790M变异，占比超过50％。EGFR酪氨酸激酶抑制剂奥希替尼，即第三代抑制剂药物，已被FDA批准用于EGFR耐药突变T790M的非小细胞肺癌复发患者。在奥希替尼治疗后，患者会再次出现继发耐药突变，以C797S突变为主。EGFR T790M与C797S突变若为顺式突变，则推荐第一代/二代抑制剂药物阿法替尼、厄洛替尼或吉非替尼联合第三代抑制剂药物奥希替尼治疗；若EGFR T790M与C797S为反式突变，则推荐Brigiation联合西妥昔单抗或帕尼单抗治疗。

Sanger直接测序方法是检测EGFR T790M与C797S顺式/反式变异的有效方法，但是，Sanger直接测序法检测限高，只能检测20％以上频率突变；操作复杂、耗费时间久，检测时间需要24小时以上，不符合目前临床诊断要求快速的特点。另一种常用方法是NGS测序法，该方法存在成本高，是Sanger测序法的几十甚至上百倍，操作复杂，耗费时间久。

发明内容

本申请的实施例提供一种检测EGFR基因T790M和C797S突变的引物组、应用、试剂盒以及方法。该方法利用试剂盒对EGFR基因T790M和C797S突变进行检测。其特异性高，灵敏度高，检测周期短。

为达到上述目的，本申请的实施例采用如下技术方案：

第一方面，本申请实施例提供了一种检测EGFR基因T790M和C797S突变的引物组，引物组包括扩增引物对与探针。

扩增引物对序列包括：

正向引物：5’-TGGGCATCTGCCTCACCTCCAC-3’SEQ ID No:1；以及，

反向引物：5’-GGTACTGGGAGCCAATATTG-3’SEQ ID No:2。

探针序列包括：

5’-CAGCTCATCATGCAGCTCATGCC-3’SEQ ID No:3。

5’-CGGCAGCCTCCTGGACTATGT-3’SEQ ID No:4。

5’-CGGCTCCCTCCTGGACTATGT-3’SEQ ID No:5。

5’-CGGAAGCCTCCTGGACTATGT-3’SEQ ID No:6。