[发明专利]一种比率荧光探针的制备方法和应用

权利要求书

1.一种比率荧光探针的制备方法，其特征在于，包括：以四(4-羧基苯基)卟吩TCPP、硝酸铜和异硫氰酸荧光素FITC为原料，进行两步溶剂热反应，即得；

所述以四(4-羧基苯基)卟吩TCPP、硝酸铜和异硫氰酸荧光素FITC为原料的具体步骤为：将四(4-羧基苯基)卟吩TCPP溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，硝酸铜溶解于水中，混合后加入苯甲酸加热搅拌处理，随后加入异硫氰酸荧光素FITC；

所述两步溶剂热反应过程为：四(4-羧基苯基)卟吩TCPP和硝酸铜两者进行第一步溶剂热反应后加入异硫氰酸荧光素FITC进行第二步溶剂热反应；

所述第一步溶剂热具体条件为：加热温度85-100℃，时间为3-4.5h；所述第二步溶剂热具体条件为：在30-50℃下搅拌反应20-28h。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一步溶剂热具体条件为：加热温度为90℃，时间为4h；所述第二步溶剂热具体条件为：35℃搅拌反应24h。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述四(4-羧基苯基)卟吩TCPP与N,N-二甲基甲酰胺的比例为1.5-2.6mg:8-15ml；所述硝酸铜与水的比例为5.4-7.5mg:0.6-1.4ml；所述苯甲酸的质量为10mg。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述四(4-羧基苯基)卟吩TCPP与N,N-二甲基甲酰胺的比例2mg:12ml；所述硝酸铜与水的比例为6.3mg:1ml。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第一步溶剂热加热搅拌后的反应液还需经历冷却、离心、洗涤过程。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，将洗涤产物加入乙醇后加入氢氧化钠的乙醇溶液，再加入异硫氰酸荧光素FITC，随后均匀混合。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述异硫氰酸荧光素FITC质量为3.5-5.8mg，所述乙醇体积为2.5-5.5ml；所述氢氧化钠乙醇溶液浓度为8-12mM，体积为0.2-0.6ml。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇体积为4ml；所述氢氧化钠溶液浓度为10mM，体积为0.4ml。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第二步溶剂热反应后冷却、洗涤、干燥后即得比率荧光探针Cu-TCPP(FITC)。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，采用乙醇洗涤5～6次，真空干燥10～12h。

11.权利要求1-10任一项所述制备方法制备得到的比率荧光探针。

12.权利要求11所述比率荧光探针在识别和检测硫化氢分子方面的应用。

13.如权利要求12所述应用，其特征在于，所述应用是将荧光探针用于水体系、有机溶剂体系或生物体中识别和检测硫化氢分子。

14.一种快速检测硫化氢浓度的方法，其特征在于，包括：将权利要求11所述比率荧光探针加入到待测溶液中，混合均匀后检测荧光响应，得到荧光强度比值并计算出硫化氢浓度，即得。

15.如权利要求14所述的快速检测硫化氢浓度的方法，其特征在于，将荧光探针溶液加入到待测溶液中后测定荧光强度，所述探针溶液为Cu-TCPP(FITC)的乙醇溶液，所述待测溶液为将硫化氢加入到HEPEs缓冲溶液中配制的溶液。