[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病病毒的双重纳米PCR检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病病毒的双重纳米PCR检测试剂盒及其应用，属于分子生物学技术领域。所述猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病病毒的双重纳米PCR检测试剂盒包括用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV的引物组和用于检测伪狂犬病病毒PRV的引物组。本发明试剂盒的引物特异性强、重复性好、灵敏度高，采用纳米双重PCR进行检测最低可以检测到5.17×10²拷贝/μL和4.46×10²拷贝/μL，比普通PCR的灵敏度高100倍；一次性检测操作即可以同时鉴别出两种病毒单独感染或共同感染，大大节约了检测时间和降低检测成本，为猪场疾病防控提供技术支持。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病病毒的双重纳米PCR检测试剂盒及其应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)会引起妊娠母猪发生流产、木乃伊胎、死胎及弱胎等繁殖障碍以及仔猪与育肥猪呼吸道疾病为主要特征的病毒性传染病，该病在全球范围内传播，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。伪狂犬病(porcine pseudorabis virus)是由猪伪狂犬病毒(PRV)引起的，该病毒是引起多种家畜和野生动物发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓质为主要症状的疱疹病毒。该病可通过猪配种进行生殖系统感染，当妊娠母猪感染后，又能通过胎盘进行垂直感染给胎儿，严重会造成流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等，导致新生崽猪数量质量的下降。

这两种疾病在临床症状上存在很多相似点：妊娠母猪发生流产、产死胎，胎儿木乃伊，新生仔猪高死亡率；育肥猪食欲不振、呕吐、腹泻、发热，呼吸困难，皮炎、关节炎，神经症状，生长迟缓，免疫力严重降低，极易继发其它病原感染：成年猪长期带毒、排毒而无临床症状，同时还是导致呼吸道病综合征的主要原发病原，所以单独看临床症状来诊断是PRRSV还是PRV是不可取的，需要靠实验室检测方法进行诊断，目前主要靠血清学和分子生物学进行诊断，所以建立检测PRRSV、PRV这两种疾病在养殖生产上是很有必要的。纳米PCR作为一种新型PCR技术，灵敏度高，特异性强，与荧光定量PCR相比，不需要特殊的实验设备，成本较低，和普通PCR相比检测灵敏度高，是目前分子生物学诊断的一种新技术。双重PCR可以利用一个PCR反应体系同时诊断两种疾病，不仅可以检测出两种疾病的单独感染，也可以检测出两种疾病的混合感染，可以节约检测时间和检测成本，再加上纳米PCR，灵敏度比普通PCR高，且不需要特殊仪器设备，是目前试剂盒开发研究的方向。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病病毒的双重纳米PCR检测试剂盒及其应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病病毒的双重纳米PCR检测试剂盒，包括用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV的引物组和用于检测伪狂犬病病毒PRV的引物组；

所述用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物组，其序列如下：

上游引物PRRSV-F：如SEQ ID NO.1所示

下游引物PRRSV-R：如SEQ ID NO.2所示；

所述用于检测伪狂犬病病毒的引物组，其序列如下：

上游引物PRV-F：如SEQ ID NO.3所示

下游引物PRV-R：如SEQ ID NO.4所示。

上述试剂盒还包括：阳性对照、阴性对照、胶体金纳米颗粒和PCR扩增液。

进一步地，所述阳性对照为含有猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV和伪狂犬病病毒PRV的重组质粒；所述阴性对照为双蒸水。