[发明专利]一种具有多种甲型流感病毒免疫原性的融合蛋白及其制备与应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体公开了一种具有多种甲型流感病毒免疫原性的融合蛋白及其制备与应用。所述融合蛋白为rM2e‑△A146PLY蛋白，从N端到C端依次包含rM2e蛋白和△A146PLY蛋白，其中，所述rM2e蛋白包含了四段来源于家禽、猪、人甲型流感病毒M2e蛋白的公共序列，其序列如SEQ ID NO.5所示；所述△A146PLY蛋白序列为SEQ ID NO.8所示；所述rM2e‑△A146PLY蛋白序列为SEQ ID NO：10所示。本发明发现ΔA146PLY蛋白具有良好的佐剂功能，将M2e蛋白多段串联起来表达与△A146PLY蛋白的N端，可以显著增强M2e蛋白的免疫原性和保护效果。本发明提供的融合蛋白具有开发为甲型流感病毒通用疫苗的潜力。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种具有多种甲型流感病毒免疫原性的融合蛋白及其制备与应用。

背景技术

甲型流感病毒属于正粘科，有包膜的RNA病毒，广泛分布于人群及家禽、猪、马等动物体内。甲型流感病毒抗原易变异，容易引起流感大流行。一百多年来，一共发生了五次全球大爆发的流感疫情。截止目前，每年的季节性流感也会导致5％-10％的世界人口感染。

目前针对甲型流感病毒的疫苗主要有灭活疫苗、减毒活疫苗、重组HA蛋白疫苗。世界卫生组织每两年需要召开会议，定期更换甲型流感疫苗的疫苗病毒。然而，这些疫苗仍存在容易出现与流行株错配，抗原易变异，不适合老人和儿童，保护效果不好等缺点。经典流感疫苗通常诱导对病毒表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)产生抗体，主要针对其免疫显性高变区。持续的抗原漂移使病毒容易逃避这些抗体的作用，降低了疫苗接种的有效性。而且，由于显著的抗原差异，这些疫苗将无法预防新出现的大流行性流感病毒。因此，人们对开发具有更长的和更广泛作用范围的新疫苗非常感兴趣。

甲型流感病毒共编码10种蛋白，其中包括8种结构蛋白：血凝素蛋白HA，神经氨酸酶蛋白NA，基质蛋白M1和离子通道蛋白M2，核蛋白NP，RNA多聚酶PB2、PB1和PA；此外还有两个非结构蛋白NS1和NS2。在甲型流感病毒的众多抗原蛋白中，血凝素蛋白 HA抗原免疫原性强的头部和保守的茎杆部，基质蛋白M2(matrix protein 2)胞外部分M2e和位于病毒包膜内的M1(matrix protein 1)抗原，以及核蛋白NP(nuclear protein)抗原是目前通用流感疫苗最关注的靶点。

其中，M2e蛋白在病毒表面体积小、丰度低，抗原不容易发生变异，有很好的保守性，是良好的通用疫苗候选蛋白。但其分子量小，免疫原性不足，有研究表明M2e本身是一种弱免疫原，只有大约一半感染甲型流感病毒的人能够产生抗M2e抗体。因此大多数研究方案都会采用不同的载体来提升M2e的免疫原性。常用的方案有：基于乙肝病毒核心抗原病毒样颗粒(HBc)的3M2e-HBc疫苗；利用纳米技术将不同种属来源的M2e蛋白包装成颗粒增强其免疫原性；将HPV VLPs、木瓜花叶病毒VLPs、T7噬菌体VLPs作为VLPs平台来展示多拷贝M2e进而提高M2e特异性抗体水平。

综上所述，目前实验室或临床上的多抗原通用流感疫苗常以“多抗原混合”或“多抗原串联”的融合表达形式呈现在载体外部，虽然具有一定的广谱型，但是大多数疫苗需要联合佐剂或季节性流感疫苗才能发挥良好的效果。因此，研发一种免疫原性更好、制剂成分单一制备简便、副作用小、保护效果更佳的甲型流感病毒通用疫苗依然具有重要的意义和广阔的前景。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种具有多种甲型流感病毒免疫原性的融合蛋白及其制备与应用，用于解决现有的甲型流感病毒疫苗保护效果不高、覆盖范围不够广泛等问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种融合蛋白，为 rM2e-△A146PLY蛋白，所述rM2e-△A146PLY蛋白从N端到C端依次包含rM2e蛋白和△A146PLY蛋白，其中，

所述rM2e蛋白包含了四段来源于家禽、猪、人甲型流感病毒的公共序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；