[发明专利]一种结核病血清标志物筛选方法及应用

权利要求书

1.一种结核病血清标志物筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：

a、将实验组的血清蛋白进行仿生亲和或亲和层析，制备实验组仿生亲和或亲和抗体层析柱；将对照组的血清蛋白进行仿生亲和或亲和层析，制备对照组仿生亲和或亲和抗体层析柱；

b、制备结核杆菌培养滤液蛋白或结核杆菌细胞浆蛋白，将结核杆菌培养滤液或结核杆菌细胞浆蛋白分别与实验组仿生亲和或亲和抗体柱亲和层析、用相同的结核菌蛋白样本与对照组仿生亲和抗体柱或亲和抗体柱层析；

c、洗脱步骤b完成后的层析柱；对所有洗脱组分进行液相色谱-质谱分析；

d、通过液相色谱-质谱分析实验组、对照组结合的结核杆菌培养滤液或结核杆菌胞浆蛋白的蛋白质组信息；

e、检索结核杆菌蛋白质组学数据库获取每种蛋白的基本生化信息；分析比较实验组结合的结核杆菌培养滤液或结核杆菌细胞浆蛋白与对照组结合的结核杆菌蛋白差异性，扣除结合在对照组血清抗体柱的结核菌蛋白，选择与结核病患者血清特异结合的结核杆菌蛋白作为结核病血清学检测标志物；

f、对步骤e构建的结核病血清标志物蛋白进行质谱数据分析、生物信息学分析与免疫学分析，得到结核病血清标志物。

2.根据权利要求1所述的一种结核病血清标志物筛选方法，其特征在于：所述步骤a中对实验组、对照组进行的仿生亲和层析所用的小分子功能配基为：L-茶氨酸；氨基比林；3-氨基苯酚；4-氨基1萘酚盐酸盐；4-2氨基乙基苯磺酰胺；1-氨基蒽醌；己胺；2,6-二氨基蒽醌；2,6-二氨基吡啶；2-苯乙酰氨；腺嘌呤；羟基丁二酰亚胺；2,4,6-三氨基嘧啶；二苯胺；十二胺；盐酸二乙胺；二苄胺；十二胺；N-乙酰-L-蛋氨酸中的一种或任意两种组合的仿生亲和配基或特异性吸附血清抗体的亲和配基。

3.根据权利要求2所述的一种结核病血清标志物筛选方法，其特征在于：所述步骤c的洗脱包括使用一步或两步洗脱法完成。

4.根据权利要求3所述的一种结核病血清标志物筛选方法，其特征在于：检测蛋白浓度为0.01mg/mL-30mg/mL。

5.根据权利要求4所述的一种结核病血清标志物筛选方法，其特征在于：所述步骤f中生物信息学分析包括：分子量、等电点、亲疏水性、亚细胞定位、蛋白毒力因子、蛋白表位分析的一种或多种组合。

6.一种检测结核病的方法，其特征在于：使用的结核病血清标志物是根据权利要求1-5所述的任意一种方法制备得到的。

7.一种检测结核病的试剂盒，其特征在于：试剂盒中使用的结核病血清标志物是根据权利要求1-5所述的任意一种方法制备所得。