[发明专利]菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：将氯代烃污染的表层土壤接种于第一培养基，然后以在所述第一培养基中的浓度计，加入1mM～1.2mM的氯代烃，进行第一培养，直至所述氯代烃转化为脱氯产物的转化率为100％，收集第一富集菌液；

S2：将所述第一富集菌液接种于第二培养基，然后以在所述第二培养基中的浓度计，加入1.3mM～1.5mM的氯代烃，进行第二培养，直至所述氯代烃转化为脱氯产物的转化率为90％以上，收集第二富集菌液；

S3：以所述第二富集菌液重复步骤S2，每传代一次氯代烃的加入量以0.1mM～0.2mM递增，且在培养过程中控制碳源与氯代烃的物质的量比为(4.5～5.5):1；直至氯代烃的浓度上升至5.4mM～5.8mM，收集第三富集菌液；

S4：将所述第三富集菌液接种于第三培养基，然后加入浓度为6.9mM～7.1mM的氯代烃，进行第三培养，在第三培养的过程中通入氢气；直至所述氯代烃转化为脱氯产物的转化率为90％以上，制备所述菌剂；

其中，所述第一培养基、第二培养基和第三培养基的组成包括厌氧矿物无机盐、还原剂、碳源和生物缓冲剂。

2.根据权利要求1所述的菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述表层土壤的接种量为每50mL所述第一培养基接种4g～6g。

3.根据权利要求1所述的菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述第一富集菌液的接种量为每80mL所述第二培养基接种1.5mL～2.5mL。

4.根据权利要求1所述的菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S3中，以所述第二富集菌液重复步骤S2的过程中，接种量为每100mL所述第二培养基接种3mL～6mL。

5.根据权利要求1所述的菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述第三富集菌液的接种量为每100mL所述第三培养基接种3mL～6mL。

6.根据权利要求1所述的菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S3中，传代的代数为25～35代。

7.根据权利要求1所述的菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述氢气的通入量为每100mL所述第三培养基通入4mL～6mL。

8.根据权利要求1～7任一项所述的菌剂的制备方法，其特征在于，以1L的容积计，所述第一培养基、第二培养基和第三培养基的组成包括：

质量分数为60％的乳酸钠溶液；

所述质量分数为60％的乳酸钠溶液的用量为控制乳酸钠与氯代烃的物质的量比为(4.5～5.5):1。

9.权利要求1～7任一项所述的制备方法制备得到的菌剂。

10.根据权利要求9所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂中，Desulfitobacterium属菌种的相对丰度为30％～35％、Clostridium_sensu_stricto_7属菌种的相对丰度为28％～33％，以及Sedimentibacter属菌种的相对丰度为15％～20％。