[发明专利]一种高效诱导巨噬细胞极化的体外培养方法

说明书

本发明公开了一种高效诱导巨噬细胞极化的体外培养方法，包括以下步骤：步骤1、在无血清条件下，将THP‑1单核细胞用PMA和GM‑CSF刺激，使其分化为巨噬细胞；步骤2、使用20 ng/mL IFN‑γ与100 ng/mL LPS诱导步骤1所分化的巨噬细胞24 h得到M1型巨噬细胞；步骤3、使用20 ng/mL IL‑4与20 ng/mL IL‑10诱导步骤1所分化的巨噬细胞24 h后得到M2型巨噬细胞。本发明采用PMA与GM‑CSF诱导THP‑1单核细胞系分化为巨噬细胞后极化的经济且完善的模型，通过对多个标志物（CD11b、CD86、CD206、iNOS、CD206，Agr‑1，IL‑1β）的检测，对其诱导分化的巨噬细胞以及极化的M1、M2型巨噬细胞进行鉴定。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种高效诱导巨噬细胞极化的体外培养方法及巨噬细胞极化分析用标志物。

背景技术

巨噬细胞具有广泛的生物学效应，如抗感染、抗肿瘤、参与免疫应答和免疫调节等，是连接人体天然免疫和特异性免疫的重要免疫细胞，广泛分布于人体多种组织器官，在许多感染及非感染性疾病中起着重要的作用，主要以固定或游离的形式对细胞残片及病原体进行吞噬和消化，激活淋巴细胞或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。

目前，获取实验所需的巨噬细胞有三种方式：（1）直接从动物或人体获取原代巨噬细胞；（2）使用集落刺激因子诱导原代单核细胞分化为巨噬细胞；（3）使用传代细胞系诱导为巨噬细胞。虽然，直接使用原代巨噬细胞和单核细胞更接近生理状态，但由于动物或人体原代细胞的获取困难、体外生存周期短,加之费用昂贵和个体间差异难以控制，因此，使用传代细胞系诱导分化为巨噬细胞仍是目前获取巨噬细胞的主要途径。但不同的分化诱导方法对分化形成的巨噬细胞的功能和特性影响较大。

巨噬细胞由单核细胞分化而来，具有独特的细胞表型，并表达一些特异性的细胞标志物。一般情况下，根据巨噬细胞的不同功能特性及其诱导Th1、Th2应答的情况，把巨噬细胞分为M1和M2两种类型。Th1细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-3、IL-12、TNF-a、细菌成分如脂多糖（LPS）和Toll样受体（TLR）激动剂等可诱导巨噬细胞极化为M1型。M1型巨噬细胞分泌促炎因子，如L-1β、IL-6、IL-12、IL-23、iNOS、TNF-a、CXCL-9和CXCL-10等,并表达主要组织相容性复合体I类（MHC I）和II类（MHC II）分子，参与炎症反应。Th2细胞因子IL-4、IL-10、IL-13、 TNF-a、TGF-β、GM-CSF、免疫复合物和TLRs等诱导巨噬细胞极化为M2型，分泌多种抗炎分子和促血管生成素，如IL-4、IL13、 IL-10、 TGF-β、糖皮质激素、VEGF和血管紧张素ANG1、ANG2等，发挥抗炎和促进组织修复作用。在癌症背景下，M1型巨噬细胞可通过细胞毒性和吞噬作用发挥抗肿瘤作用，M2型巨噬细胞与不良预后相关，其血管生成和免疫抑制功能促进肿瘤生长。