[发明专利]牦牛瘤胃厌氧真菌和甲烷菌共培养物降解芦苇秆生产漆酶的方法及应用

权利要求书

1.一种自然共生的混合培养物降解废弃物生产漆酶的方法，其特征在于，所述的混合培养物由厌氧真菌(Neocallimastix frontalis)和甲烷菌(Methanobrevibactergottschalkii)的组成，所述的方法包括如下步骤：

(1)混合培养物菌剂的制备：向以小麦秸秆为底物的厌氧培养基中接入混合培养物，加入复合抗生素，厌氧培养，即得到高活力的菌剂；

(2)生产漆酶：吸取步骤(1)所得菌剂接入以芦苇秆为底物的厌氧培养基中，加入复合抗生素，厌氧培养，即得；所述的自然共生的混合培养物为YakQH5，于2020年3月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19299，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，电话：010-64807355。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中混合培养物的接种量为10％v/v。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中菌剂的接种量为10％v/v。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中芦苇秆含量为1％w/v。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中厌氧培养的温度为39℃，时间为72h。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中厌氧培养的温度为39℃，时间为120h。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复合抗生素由终浓度为1600IU/mL的青霉素钠和2000IU/mL的硫酸链霉素组成；所述复合抗生素的加入量为1％v/v。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述厌氧培养的培养基配方为：酵母膏1.0g，NaHCO₃ 7.0g，1.0g/L刃天青1mL，L-半胱氨酸盐酸盐1.7g，盐溶液Ⅰ82.5mL，盐溶液II16.5mL，蒸馏水定容至1000mL；所述的盐溶液I配制步骤如下：NaCl 6g，(NH₄)₂SO₄ 3g，KH₂PO₄3g，CaCl₂·2H₂O 0.4g，MgSO₄·2H₂O 0.6g，蒸馏水定容至1000mL；所述的盐溶液II配制步骤如下：4g K₂HPO₄，蒸馏水定容至1000mL。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，接入芦苇杆后除氧，充入二氧化碳，高温高压灭菌。