[发明专利]一种环孢霉素A衍生物及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种环孢霉素A衍生物及其制备方法和应用。该环孢霉素A衍生物具有式I所示的结构，免疫原性强，可满足全自动化学发光检测平台定量检测需求，与常见干扰药物间不存在交叉反应；且以该半抗原衍生物为抗原制备的CsA检测试剂特异性强、精密性高、准确度高、稳定性良好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种环孢霉素A衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

环孢霉素A(cyclosporin，CsA)是一种内含11个氨基酸的环状多肽化合物，对细胞和体液免疫有较高选择性抑制作用，是一种淋巴细胞激活抑制剂。主要被用于各种器官移植和一些自身免疫性疾病、血液系统疾病等。但由于CsA体内过程个体差异大，治疗窗窄，其血药浓度过高会引起毒副作用，尤其对肝、肾的毒性；浓度过低，则治疗效果低或无效，甚至造成器官移植排斥作用的发生。因此，监测全血中CsA的血药浓度并调整其浓度在有效范围在临床合理用药中是非常必要的。

目前国内、外主要的检测技术包括：高效液相色谱法，放免法，荧光偏振法，化学发光法，电化学发光法，均相酶免疫法等。但这些方法在临床应用上都具有一定的缺陷性。目前市场上缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的环孢霉素A监测试剂，尤其是质量好的自动化检验试剂。因此，研发生产质量达到临床要求、实用性强、性价比高，可应用于全自动生化分析仪的环孢霉素A测定试剂已成为国内外体外诊断试剂行业的热点，当前主要研究方向是合成出高效的环孢霉素A衍生物作为半抗原，通过标记与抗体发生特异性反应进行检测。

关于CsA半抗原衍生物,目前公开的多为基于对CsA中游离羟基进行修饰、对双键末端甲基碳进行碳链延长得到。其中，游离羟基由于所处区域空间位阻较大，导致羟基修饰过程收率不理想，甚至无法得到目标物；双键末端碳链延长的制备方案具有条件苛刻，技术难度较高，不利于产业化生产应用等缺陷。故开发一种符合临床要求、实用性强、性价比高，且可应用于全自动生化分析仪的环孢霉素A测定试剂盒必须克服CsA半抗原衍生物制备的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种环孢霉素A衍生物及其制备方法和应用。该环孢霉素A衍生物较环孢霉素A具有更强的免疫原性，作为抗原检测环孢霉素A特异性强、精密性高、准确度高、稳定性良好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种环孢霉素A衍生物，具有式I所示的结构：

R选自-NH(CH₂)_nNH₂、其中，n＝2～7，m为0或1。

一些实施方案中，所述环孢霉素A衍生物具有式I-1～I-5所示的任意一种结构：

本发明还提供了所述的环孢霉素A衍生物的制备方法，其特征在于，包括：

1)、将CsA溶于第一溶剂中，在氧化剂作用下进行双键环氧化反应，得到式II结构的CsA环氧乙烷化产物；

2)、在第二溶剂中，所述CsA环氧乙烷化产物与烷基二胺通过回流反应进行开环，得到环孢霉素A衍生物；

一些实施方案中，步骤1)中，将CsA溶于第一溶剂中，在氧化剂作用下进行双键环氧化反应，得到CsA环氧乙烷化产物。其中，第一溶剂对CsA具有良好溶解性，包括四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜中的至少一种，包括但不限于此；所述氧化剂为过氧单磺酸钾、间氯过氧苯甲酸、叔丁基过氧化氢中的至少一种；所述CsA与氧化剂的摩尔比为1:1～1:15，具体可为1:1或1:15；所述双键环氧化反应的温度为18℃～30℃，具体可为18℃或30℃。