[发明专利]共装载化疗药物和小分子抑制剂的聚合物纳米粒及其制备方法

权利要求书

1.共装载化疗药物和小分子抑制剂的聚合物纳米粒，其特征在于，由磷酸化吉西他滨、HJC0152、乏氧敏感交联剂、树枝状聚赖氨酸单体、核酸适配体GBI-10及注射溶媒制成；其中，所述树枝状聚赖氨酸浓度为0.1-100mg/mL，磷酸化吉西他滨浓度为0.01-10mg/mL，磷酸化吉西他滨和树枝状聚赖氨酸的质量比为1：15-1：50。

2.按权利要求1所述的共装载化疗药物和小分子抑制剂的聚合物纳米粒，其特征在于，所述的乏氧敏感交联剂为经对硝基氯甲酸苯酯活化的单硝基化的均三苄醇，

3.按权利要求1所述的共装载化疗药物和小分子抑制剂的聚合物纳米粒，其特征在于，所述纳米粒表面修饰胰腺癌靶向核酸适配体GBI-10，其碱基序列为：CCCAGAGGGAAGACTTTAGGTTCGGTTCACGTCC。

4.按权利要求1所述的共装载化疗药物和小分子抑制剂的聚合物纳米粒，其特征在于，所述纳米粒，在20μM连二亚硫酸钠弱乏氧条件下，其可解离为疏松团状结构，粒径明显增大；在200μM连二亚硫酸钠强乏氧条件下，其可完全解离为单个DGL分子。

5.按权利要求1所述的共装载化疗药物和小分子抑制剂的聚合物纳米粒，其特征在于，所述的注射溶媒是注射用水、生理盐水或磷酸盐缓冲液。

6.权利要求1所述的共装载化疗药物和小分子抑制剂的聚合物纳米粒的制备方法，其特征在于，其包括步骤：

1)合成偶连HJC0152的乏氧敏感交联剂，其中，

a.称取均三苄醇溶于DMF，冷却至0℃，加入3-5倍当量的咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷，将反应移出冰浴，自然恢复至室温，搅拌1-5小时；加入乙酸乙酯稀释反应液，再加入饱和氯化铵溶液洗涤稀释液，收集有机相，加入无水硫酸钠干燥，乙酸乙酯减压蒸除，粗反应混合物经由硅胶色谱柱(乙酸乙酯：石油醚5:95，v:v)分离纯化，产物为无色油状物；

b.量取乙酸酐冷却至0℃，滴如硝酸，乙酸酐和硝酸体积比为20：1-5：1，室温搅拌10-30分钟；冷却至-20℃，称取a中产物2-10g溶于乙酸酐，缓慢滴入上述预冷的硝酸溶液；升温至0℃，搅拌0.5-3h；加入乙酸乙酯稀释反应液，分别利用饱和碳酸钠溶液、饱和食盐水洗涤稀释液，收集有机相，加入无水硫酸钠干燥，乙酸乙酯减压蒸除，粗反应混合物经由硅胶色谱柱(乙酸乙酯：石油醚5:95，v:v)分离纯化，产物为淡黄色油状物；

c.称取b中产物1-5g溶于10-50mL甲醇：二氯甲烷(1:1，v:v)混合溶液，加入0.05–0.3当量阳离子交换树脂Amberlyst 15，室温下搅拌过夜；硅藻土柱滤去阳离子交换树脂，减压蒸除反应溶剂，粗反应混合物经由硅胶色谱柱(乙酸乙酯：石油醚9:1，v:v)分离纯化，产物为白色粉末；

d.称取c中产物20-500mg溶于干燥四氢呋喃，加入催化量DMAP，4-10倍当量吡啶，室温搅拌30分钟-2小时，冷却至0℃，4-10倍当量对硝基氯甲酸苯酯溶于干燥四氢呋喃，缓慢滴入上述预冷反应液，0℃搅拌2-8小时；加入乙酸乙酯稀释反应液，加入饱和氯化铵溶液洗涤稀释液，收集有机相，加入无水硫酸钠干燥，乙酸乙酯减压蒸除，粗反应混合物经由硅胶色谱柱(乙酸乙酯：石油醚1:1，v:v)分离纯化，产物为淡黄色固体；

e.称取功能化乏氧敏感三元交联剂10-500mg溶于3-50mL干燥DMF，加入0.7-1.5当量DMAP，0.7-1当量的HJC0152溶于3-50mL干燥DMF，缓慢滴入上述溶液，室温搅拌1-5小时；加入乙酸乙酯稀释反应液，加入饱和氯化铵溶液洗涤稀释液，收集有机相，加入无水硫酸钠干燥，乙酸乙酯减压蒸除，粗反应混合物经由硅胶色谱柱(乙酸乙酯：石油醚9:1，v:v)分离纯化，产物为淡黄色固体；

2)制备交联DGL制备纳米粒、载药和表面修饰，其中，

a.称取DGL溶于甲醇，溶液终浓度为0.1-10mg/mL，称取连接HJC0152的乏氧敏感三元交联剂溶于二氯甲烷，溶液终浓度为0.1-10μg/mL，二者按摩尔比5:1混合，旋蒸除去有机溶剂，加入2ml去离子水，超声半小时；纯水透析除去对硝基苯酚，冻干，得交联纳米粒；

b.称取a中纳米粒复溶于甲醇，双药交联剂溶于二氯甲烷，二者按摩尔比1：3均匀混合，旋蒸除去有机溶剂，加入去离子水，超声半小时；纯水透析除去对硝基苯酚，冻干，得表面修饰交联纳米粒；

c.称取b中纳米粒复溶于PBS，调节pH为8.0，称取磷酸化吉西他滨溶于PBS，溶液终浓度为0.1-10mg/mL，将上述两溶液按溶质摩尔比10：1-1：10混合，涡旋10-60分钟，透析法除去未负载的游离磷酸化吉西他滨；

d，称取核酸适配体GBI-10溶于PBS，溶液终浓度为10-1000nmol/mL，将b中载药纳米粒溶液与上述溶液混合，N/P比为5：1-1：3，涡旋0.5-5分钟，静置10-60分钟，得共装载化疗药物和小分子抑制剂的聚合物纳米粒。