[发明专利]一种基于全自动纳米磁珠法提取唾液中核酸RNA的通用试剂组合

说明书

本发明公开了一种基于全自动纳米磁珠法提取唾液中核酸RNA的试剂组合，包括裂解液和漂洗液。所述裂解液包括3~5mol异硫氰酸胍、0.4%~0.5%十二烷基肌氨酸钠、0.05~0.15mmolB‑巯基乙醇、20~30mmol柠檬酸钠、10~30ug糖、0.02%~0.03%叠氮钠；所述漂洗液是20~30%10mmol/L Tris‑HCL、75%无水乙醇。其中组分中额外添加了叠氮钠增加核酸提取中蛋白质的去除。本组合的漂洗液是20~30%10mmol/lL Tris‑HCL、75%无水乙醇。本发明所提供的裂解成分的改变，能够有效地促进样本中核酸的释放，提高了磁珠结合核酸的效率。洗涤液的改变，保证了结合RNA的磁珠能够稳定，获得有效的清洁，杂质的去除，并保证了核酸提取后的质量能够用于下游检测的应用。

技术领域

本发明涉及生物医药行业，特别涉及一种基于全自动磁珠法提取唾液中核酸RNA的试剂。

背景技术

核糖核酸(缩写为RNA，即Ribonucleic Acid)，是存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。在很多的传染性疾病或者病毒感染类的疾病体外诊断中，常常需要检测病原体的核酸RNA物质。唾液成为了检测中的一种简便、无痛，采集成本低、快捷的一种理想样本。但是由于唾液本身含有各种酶和各种口腔细菌，因此提取要在样本中获得微量的检测病原体基因，是保证下游应用的关键。

目前市面上有很多的核酸提取试剂盒，主要为酚-氯仿法、滤膜离心柱法、磁珠法等。不同的提取方法在获得核酸RNA上存在着较大的差距。而自新冠爆发以来，为了加快疫情的控制，提高检测速度，磁珠法的全自动提取获得了人们的普遍认可，磁珠法作为新的核酸提取方法,因其操作简单,不需要负压或反复离心,且易于自动化等优点受到了越来越广泛的应用。并且其全自动的提取模式，加快了检测速度，避免了交叉污染，成为了传染病检测中的有效手段。

试剂盒中最为普遍应用的裂解液成分主要为蛋白质变性剂胍盐，它能破坏细胞从而释放出唾液中核酸物质。而裂解液强度的不同往往会导致获得的RNA核酸的质量和回收率的不同。目前最为普遍应用的结合液的成分是异丙醇，选用乙醇往往在会易导致对RNA的回收效率稍差。异丙醇的终浓度控制一般在40%，不同的结合液离子成分不同，也会影响磁珠对于核酸的结合能力。

就目前几款常见的核酸磁珠法提取试剂盒来讲，仍然存在着提取的核酸质量差，提取量低，提取时间长等问题。主要原因在于不同厂家生产的磁珠在其磁珠的大小直径的稳定性和磁珠包被基团的能力的差异。而裂解液的成分和结合液的成分针对不同的试剂盒，差别较大，适应性差，因此亟需一种适应性强，提取质量高，成分稳定的适用市面上常见的磁珠的提取液组合。

发明内容

本发明解决的技术问题：提供一种能够适用市面上常见的用于核酸提取用的磁珠的一款通用核酸提取液组合，包括裂解液和漂洗液两种试剂。该提取液组合成分稳定，适用范围广，适应性强，提取质量高，可适配市面上常见的磁珠法核酸RNA提取试剂盒。

本发明提供的技术方案，所述裂解液包括3~5mol 异硫氰酸胍、0.4%~0.5%十二烷基肌氨酸钠、0.05~0.15mmolB-巯基乙醇、20~30mmol柠檬酸钠、10~30ug糖、0.02%~0.03%叠氮钠。其中组分中额外添加了叠氮钠增加核酸提取中蛋白质的去除。该裂解液主要用于提取唾液样本的核酸RNA提取，叠氮钠的使用能够限制样本中各种酶的活性，保护核酸，避免降解。该裂解液仅需在室温下作用5分钟后加入异丙醇至终浓度为40%，则可以达到磁珠进行核酸RNA吸附的最佳离子环境。裂解液能够满足市场中常见羟基和羧基修饰磁珠，而且磁珠的使用量一般为裂解液的10%-40%为最佳比例，磁珠的浓度一般为100mg/Ml-200mg/Ml。

本组合的漂洗液：取漂洗液是20~30% 10mmol/lL Tris-HCL 、75%无水乙醇。该漂洗液对分离后的磁珠进行3次清洗即可有效地去除杂质，保证核酸提取的质量。Tris-HCL的加入能够有效地保证结合有核酸的磁珠稳定，保证吸附过程中磁珠的回收效率。将漂洗回收的磁珠进行干燥，然后用无RNA酶的水进行洗脱，即可获得核酸RNA。