[发明专利]利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法

权利要求书

1.一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）授粉：选择因幼胚败育而无法获得杂交种的文心兰、文心兰近缘属材料为亲本，进行人工辅助杂交授粉；

（2）胚胎挽救：

21）取授粉后第60~90 d果荚；

22）果荚消毒；

23）幼胚接种：在无菌条件下，将果荚内未成熟的幼胚取出，并接种于幼胚挽救培养基上；

24）幼胚萌发培养：将步骤23）接种后的幼胚进行离体培养；

25）幼胚分化培养：将步骤24）获得的萌发的幼胚转接至未使用的幼胚挽救培养基上，进行分化培养，直至幼胚发育成杂种F1幼苗；

步骤（2）中所述幼胚挽救培养基，配方如下：KNO₃ 1800~2000 mg/L、NH₄NO₃ 1500~1800mg/L、KH₂PO₄ 150~200 mg/L、MgSO₄·7H₂O 350~400 mg/L、CaCl₂·2H₂O 420~460 mg/L、MnSO₄·H₂O 14~20 mg/L、ZnSO₄·7H₂O 6~10 mg/L、H₃BO₃ 5~10 mg/L、KI 0.5~1 mg/L、Na₂MoO₂·2H₂O 0.1~0.5 mg/L、CoCl₂·6H₂O 0.01~0.05 mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.01~0.05 mg/L、FeSO₄·7H₂O 16~35 mg/L、Na₂EDTA 30~40 mg/L、盐酸硫胺素0.05~0.2 mg/L、烟酸0.1~0.9 mg/L、盐酸吡哆醇0.1~0.8 mg/L、甘氨酸0.5~5 mg/L、肌醇60~120 mg/L、蔗糖30~45 g/L、琼脂4~10 g/L、活性炭0.2~0.6 g/L、椰子汁80~150 ml/L、6-苄氨基嘌呤0.4~0.6 mg/L、1-萘乙酸0.1~0.3 mg/L。

2.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤（1）中所述幼胚败育的标准：受精后障碍导致幼胚发育受阻无法自然结实。

3.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤（1）中所述人工辅助杂交授粉，具体方法：选择当天或即将开放的花朵，用父本新鲜的花粉团授粉，并去除没有授粉的花朵。

4.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤21）中所述果荚的采收时期：发生早衰之前，果荚顶部还未出现黄化时。

5.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤22）中所述消毒方法：将采收的果荚置于巴士消毒液和水1：1配置的混合溶液中，于37 ℃、190 rpm摇床处理20~30 min，然后用无菌水清洗2~3次，备用。

6.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤24）中所述的幼胚萌发条件：温度20~25 ℃、光照强度800~1000lux、光周期8~16 h/d。

7.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤25）中所述的分化培养条件：温度20~25 ℃、光照强度1200~1800lux、光周期8~16 h/d。