[发明专利]一种快速检测格特隐球菌的方法在审
| 申请号： | 202111405179.5 | 申请日： | 2020-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN113862393A | 公开（公告）日： | 2021-12-31 |
| 发明（设计）人： | 薛新颖;刘玉霞;赵晟;臧学磊 | 申请（专利权）人： | 北京量觉科技有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京龙双利达知识产权代理有限公司 11329 | 代理人： | 毛威;肖鹂 |
| 地址： | 100041 北京市丰台区南四环西*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 格特隐 球菌 方法 | ||
1.一种用于检测格特隐球菌的引物探针组合，其特征在于，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述探针为核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的物质。
2.根据权利要求1所述的引物探针组合，所述探针的5’端连接有荧光报告基团，3’端连接有荧光淬灭基团。
3.根据权利要求2所述的引物探针组合，所述探针为HEX 5’-TCGGATGATGATCCTGAGACCGACG-3’BHQ1。
4.根据权利要求1所述的引物探针组合，所述引物特异性识别所述格特隐球菌中如SEQID NO:6所示的核苷酸序列。
5.一种用于检测格特隐球菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：如权利要求1-4中任一项所述的引物探针组合。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述上游引物的浓度为10nmol/mL，所述下游引物的浓度为10nmol/mL。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述探针的浓度为10nmol/mL。
8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，每25μL所述试剂盒的反应体系中包括0.5μL所述上游引物、0.5μL所述下游引物。
9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，每25μL所述试剂盒的反应体系中包括0.5μL所述探针。
10.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：缓冲液，每25μL所述反应体系中包括2.5μL所述缓冲液。
11.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：模板DNA，每25μL所述反应体系中包括1μL所述模板DNA。
12.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：脱氧核苷三磷酸dNTP，每25μL所述反应体系中包括2μL所述dNTP。
13.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：DNA聚合酶，每25μL所述反应体系中包括0.25μL所述DNA聚合酶。
14.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：超纯水，每25μL所述反应体系中包括17.25μL所述超纯水。
15.根据权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为10×缓冲液，所述DNA聚合酶的浓度为5U/μL。
16.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的荧光聚合酶链式反应PCR扩增的反应过程包括：
第一过程，95℃预变性10min；
第二过程，95℃，10s；
第三过程，60℃，60s；
第四过程，循环第二过程至第三过程45次。
17.一种检测格特隐球菌的方法，其特征在于，所述方法包括：
获取待测样本；
从所述待测样本中提取模板DNA；
对所述模板DNA进行荧光PCR扩增以获取扩增结果，所述荧光PCR扩增的反应物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述探针为核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的物质；
根据所述扩增结果判断所述待测样本中所述格特隐球菌的检测结果为阳性或阴性。
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