[发明专利]一种蛋氨酸亚砜酰亚胺快速检测方法

说明书

本发明公开了一种蛋氨酸亚砜酰亚胺快速检测方法，包括以下步骤：(1)MSX衍生：采用AQC衍生试剂，利用AccQ Tag方法分别对MSX标准溶液和待测样品溶液进行衍生化处理得到衍生化标准品和衍生化待测样品；(2)液相色谱检测：分别将衍生化标准品和衍生化待测样品进行液相色谱检测，对检测结果进行分析，绘制标准曲线，根据标准曲线计算待测样品溶液中MSX的浓度。本发明方法衍生简单，无需复杂衍生试剂的配制或萃取，检测快速，反应时间短，衍生约需要10min即可。无需特殊仪器设备，且流动相配制简单，单个流动相配制时无需与有机溶剂混合。进样体积约5μL，便于微量样品的检测。本方法的检测下限为25pmol，比目前专利方法低80％，显著低于目前专利报道的检测下限。

技术领域：

本发明属于蛋氨酸亚砜酰亚胺(L-Methionine Sulfoximine，MSX)工艺残留检测技术领域，具体涉及一种MSX快速检测方法。

背景技术：

L-蛋氨酸亚砜酰亚胺是蛋氨酸的特殊衍生物，具有氨基酸的基本结构(氨基、羧基、R 基侧链)。MSX是用于谷氨酰胺合成酶系统(GS)中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的筛选剂，用于筛选出转染目的基因的克隆。由于MSX是一种培养工艺中的添加物，作为一种工艺相关的杂质，在最终产品(DP，drug product)中的残留是监管部门关注的。为了证实MSX在工艺中使用不影响产品安全性，其在DP中的残留量需要进行检测。

目前，MSX的检测方法有HPLC柱前衍生(一种MSX残留的HPLC柱前衍生化检测方法，专利201810410377)，然后使用常规的紫外检测器进行检测。但这种方法样品先进行衍生，然后使用HPLC检测。衍生使用三乙胺和异硫氰酸苯酯，还需加入正已烷后静置，然后进行过滤，最后进行样品检测，样品衍生程序复杂、衍生时间较长且进样体积较大。而且，检测下限较高(专利201810410377检测下限为150pmol)。因此，需要提供一种简单快捷的蛋氨酸亚砜酰亚胺(MSX)快速检测方法。

发明内容：

针对背景技术提出的技术问题：目前MSX工艺残留检测方法衍生程序复杂、衍生时间较长；流动相配制比较复杂；而且，进样体积大，不利于微量样品检测。更重要的是，目前方法检测下限较高，为150pmol。本发明的目的在于提供一种蛋氨酸亚砜酰亚胺(MSX) 快速检测方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种蛋氨酸亚砜酰亚胺快速检测方法，该方法包括以下步骤：

(1)MSX衍生：采用AQC衍生试剂6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯利用AccQ Tag方法分别对MSX标准溶液和待测样品溶液进行衍生化处理得到衍生化标准品和衍生化待测样品；

(2)液相色谱检测：分别将衍生化标准品和衍生化待测样品进行液相色谱检测，对检测结果进行分析，绘制标准曲线，根据标准曲线计算待测样品溶液中MSX的浓度；

所述液相色谱检测的色谱条件为：Aglient Pursuit XRs 5 C18色谱柱，流动相A相为0.05～0.15mol/L乙酸钠水溶液，pH 6.0～7.0；流动相B相为100％乙腈；色谱柱温度为30～40℃，采用流动相进行梯度洗脱。

作为一种优选技术方案：所述流动相的洗脱梯度为：按体积百分含量计，洗脱开始采用 93％流动相A，7％流动相B；15min开始为82％流动相A，18％流动相B；18min开始为50％流动相A，50％流动相B；23～33min为20％流动相A，80％流动相B；33.01～40min 为93％流动相A，7％流动相B。

进一步优选的：所述液相色谱检测的色谱条件为：Aglient Pursuit XRs 5 C18250×4.6 mm色谱柱，流动相A相为0.1mol/L乙酸钠水溶液，pH 6.5；流动相B相为100％乙腈；色谱柱温度为35℃。

更进一步优选的：所述检测的波长254nm；进样量5μL；流动相流速为1.0ml/min。