[发明专利]磁性单滴微萃取荧光开关结合PDA涂层囊泡检测GST的方法

权利要求书

1.磁性单滴微萃取荧光开关结合PDA涂层囊泡检测GST的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1、Fe₃O₄的制备

将FeCl₃·6H₂O溶于乙二醇，搅拌至溶液澄清呈现黄色透明为止，再加入NaAC，剧烈搅拌、超声，然后倒入聚四氟乙烯反应釜，反应后冷却至室温，乙醇洗涤、干燥；

S2、Fe₃O₄@PDA的制备@Aptamer@GST

先将Fe₃O₄加入Tris-HCI缓冲液中超声，然后再加入PDA，避光混合机械搅拌得到Fe₃O₄@PDA，水洗后再加入Aptamer孵育，然后向其中加入不同浓度的GST，振荡器震荡、待用；

S3、囊泡的制备

按PCDA:DMPC摩尔比为3:2称取样品，依次向其中加入乙醇、一氯甲烷，N₂吹干后加入去离子水形成悬浮液、加热并超声、冷却至室温，之后UV照射获得稳定的囊泡，4℃过夜以备用；

S4、囊泡@PDA@互补DNA

向S3制备的囊泡中加EDC和PDA，振荡后加氢氧化钠溶液将pH调至8.5，然后取囊泡@PDA，依次加水、互补DNA孵育；

S5、吸管尖端磁棒的制备

配置琼脂糖凝胶并倒入移液管后室温下静置固化，然后将移液管尖端底部切断、修平，再加入502型胶水，将吸管头填满；

S6、单滴微萃取过程

将GST溶液加入色谱瓶里，然后将pH为5.5的醋酸钠-醋酸缓冲溶液滴到吸管尖端磁棒上，再将该磁棒伸入溶液中反应6s，之后将该磁棒提取出来，再将囊泡@PDA@互补DNA溶液加到磁棒上反应10min，然后取2μL检测荧光。

2.根据权利要求1所述的磁性单滴微萃取荧光开关结合PDA涂层囊泡检测GST的方法，其特征在于，S1中乙二醇的体积与FeCl₃·6H₂O和NaAC的质量比范围为：1:50:12。

3.根据权利要求1所述的磁性单滴微萃取荧光开关结合PDA涂层囊泡检测GST的方法，其特征在于，S1中剧烈搅拌30～40分钟，超声10～20分钟，反应釜内反应时间控制在10～12小时，乙醇洗涤3次以上，干燥至少12小时。

4.根据权利要求1所述的磁性单滴微萃取荧光开关结合PDA涂层囊泡检测GST的方法，其特征在于，S2中Fe₃O₄与PDA的质量比范围为0.025:1～0.5:1，Tris-HCI的用量为100～400mL，Aptamer与Fe₃O₄@PDA的比例范围为1:5～1:10。

5.根据权利要求1所述的磁性单滴微萃取荧光开关结合PDA涂层囊泡检测GST的方法，其特征在于，S2中GST的浓度为0.5～50μg/mL，Aptamer的浓度为0.1～1μM。

6.根据权利要求1所述的磁性单滴微萃取荧光开关结合PDA涂层囊泡检测GST的方法，其特征在于，S2中超声至少半小时以上，机械搅拌6～10小时，水洗三次以上，孵育温度控制在25～30℃，时间1～2小时，振荡30～60分钟。

7.根据权利要求1所述的磁性单滴微萃取荧光开关结合PDA涂层囊泡检测GST的方法，其特征在于，S3中乙醇和一氯甲烷的用量均小于1mL，水的体积小于有机物的50倍，加热温度控制在70℃以下，加热和超声时间均小于10分钟。

8.根据权利要求1所述的磁性单滴微萃取荧光开关结合PDA涂层囊泡检测GST的方法，其特征在于，S4中囊泡与EDC和PDA的体积比为4:1～5:1，EDC和PDA质量比为1:1，互补DNA与囊泡@PDA的体积比为1:5～1:10，互补DNA的浓度为0.1～1μM。