[发明专利]番茄环纹斑点病毒检测试剂

说明书

本发明提供了一种番茄环纹斑点病毒检测试剂。将经过优化的编码TZSV病毒N蛋白的基因表达纯化得到TZSV病毒N蛋白，获得2株特异性的杂交瘤细胞株，从中分别可以得到特异性的抗TZSV病毒单克隆抗体。用该单克隆抗体制备了检测番茄环纹斑点病毒的试纸。实验证实，本发明的检测试纸条对TZSV具有特异性，可实现对叶片等样品中TZSV病毒的+快速检测，且灵敏度高，操作方便。

技术领域

本发明涉及植物病毒检测技术领域，具体地说，涉及一种番茄环纹斑点病毒(TZSV)检测试剂。

背景技术

番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,以下或简称TZSV)属于正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)，2005年在我国首次发现，目前主要分布在云南、广西等地，侵染烟草、辣椒、番茄等作物。该病毒可引起斑萎病，严重时甚至绝收，给农业生产造成重大经济损失。田金艳等制备了TZSVN蛋白的单克隆抗体，并制备了检测试纸条，然而，至今市场上仍没有商品化的TZSV检测试纸条。

发明内容

本发明的目的是提供一种番茄环纹斑点病毒(TZSV)病毒胶体金检测试剂。

为了实现本发明目的，本发明将经过优化的编码TZSV病毒N蛋白的基因(SEQ IDNO:2)构建到大肠杆菌表达系统中，表达纯化得到TZSV病毒N蛋白；然后用该TZSV病毒N蛋白免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠，再用免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。

经筛选，获得2株特异性的杂交瘤细胞株。它们的保藏编号分别为CCTCCNo.C202160和CCTCC No.C202196。

从上述两个杂交瘤细胞株可以得到特异性的抗TZSV病毒单克隆抗体。

抗TZSV病毒单克隆抗体的获得方法如下：复苏杂交瘤细胞，制备腹水，将腹水经过纯化获得特异性单克隆抗体。

用上述本发明获得的单克隆抗体能够制备番茄环纹斑点病毒检测试剂。

在本发明的一个实例中，提供了一种番茄环纹斑点病毒(TZSV)胶体金检测试纸(TZSV手持式胶体金速测试纸)，所述检测试纸由样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和背板组成；样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫(吸收垫)依次相互叠加粘贴在背板上，各部分之间相互叠加2-3mm；金标垫上包被有胶体金标记的抗TZSV病毒单克隆抗体；硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线(T线和C线)，所述检测线包被有抗TZSV病毒单克隆抗体，所述质控线包被有抗鼠IgG二抗；

其中，所述抗TZSV病毒单克隆抗体(鼠抗TZSV单克隆抗体)由保藏编号为CCTCCNo.C202160和CCTCC No.C202196的杂交瘤细胞株分泌产生。

抗TZSV病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的获得方法如下：将编码TZSV病毒N蛋白(SEQ ID NO:2)的基因经过优化重组构建到大肠杆菌表达系统中，表达纯化得到重组TZSV病毒；用该重组TZSV病毒免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠，再用免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，筛选获得特异性单克隆抗体细胞株。

优选地，所述样品垫为玻璃纤维素膜。

优选地，金标垫上包被的胶体金标记的抗TZSV病毒单克隆抗体的浓度为0.3-0.5mg/ml。

优选地，所述检测线包被的抗TZSV病毒单克隆抗体的浓度为0.5-1.5mg/ml。

优选地，所述质控线包被的抗鼠IgG二抗的浓度为1mg/ml.

优选地，所述样品垫的大小为3mm×15mm，金标垫的大小为3mm×3mm，硝酸纤维素膜的大小为3mm×28mm，吸收垫的大小为3mm×19mm。

优选地，所述检测线与质控线之间的间距为6-6.5mm。