[发明专利]用于检测人HLA-B*8基因的引物组、探针、试剂盒和方法

说明书

本申请公开了一种用于检测人HLA‑B*8基因的引物组、探针、试剂盒和方法,属于生物医药工程的技术领域，其中用于检测人HLA‑B*8基因的检测引物及其相应探针包括根据HLA‑B*8等位基因特异位点设计的引物组和探针，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；引物组包括SEQ ID NO：12所示的正向引物和SEQ ID NO：33所示的反向引物；或其互补序列。本申请具有快速准确地对HLA‑B*8基因进行检测的效果。

技术领域

本申请涉及生物医药工程的技术领域，尤其是涉及一种用于检测人HLA-B*8基因的引物组、探针、试剂盒和方法。

背景技术

人类白细胞抗原(HLA)是人类的主要组织相容性复合体(MHC)的基因簇编码产物，位于6号染色体的短臂上，其化学本质为糖蛋白，由一条被糖基化的α重链和一条β轻链非共价结合而成。多态性是HLA分子的重要特征，按功能可分为HLA-Ⅰ类分子和HLA-Ⅱ类分子。其中，HLA-Ⅰ类分子由位于6号染色体上的三个等位基因(HLA-A、HLA-B和HLA-C)编码，分布在所有的有核细胞中，负责呈递由细胞溶质蛋白质降解而产生的肽至细胞表面，其在人体抵抗入侵病原体中以及识别癌细胞中起到重要的作用。

自身免疫性肝炎(AIH)是一种具有自身免疫基础的慢性炎症坏死的肝脏疾病，其以存在血清自身抗体、γ-球蛋白浓度增高以及常伴有肝外自身免疫综合征为特点，发病率约为20-30/百万，占慢性肝炎的10％-20％，是慢性非病毒形肝炎中较常见的一种类型。

根据患者血清携带抗体的类型和遗传标志物不同，可将AIH分为两种类型：Ⅰ型(ANA和/或SMA阳性，部分抗肌动蛋白抗体阳性)和Ⅱ型(LKM-1、抗细胞色素P450ⅡD6或抗核心序列254～271抗体阳性)。其中，Ⅰ型又称为经典型，其HLA单倍型为HLA-A*1、HLA-B*8、HLA-DR3以及HLA-DR4；Ⅱ型中HLA单倍型为HLA-B*14、HLA-DR3。对于不同类型的AIH需要采取不同的治疗措施，但是，AIH在病理学上以汇管去和小叶间隔周围肝细胞呈小碎片样坏死以及炎性细胞浸润为特征，单凭病理学检查较难对AIH进行分型诊断，所以需要对血液中的HLA单倍型进行分型，涉及到HLA-B*8等基因的检测。

目前，对于HLA-B*8基因的检测一般采用Sanger测序法，Sanger测序法利用因双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)缺乏PCR延伸所需的3’-OH导致链延伸终止的原理。但是Sanger测序法通过进行多次扩增得到多段DNA片段，且需要对扩增得到的DNA进行电泳，操作较为繁琐，检测所需要的时间长。

发明内容

为了快速准确地对HLA-B*8基因进行检测，本申请提供一种用于检测人HLA-B*8基因的引物组、探针、试剂盒和方法。

第一方面，本申请提供一种用于检测人HLA-B*8基因的检测引物组及其相应探针，采用如下的技术方案：

一种用于检测人HLA-B*8基因的检测引物组及其相应探针，包括根据HLA-B*8等位基因特异位点设计的引物组和探针，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述引物组包括SEQ ID NO：12所示的正向引物和SEQ ID NO：13所示的反向引物；或其互补序列。

第二方面，本申请提供了一种用于检测人HLA-B*8等位基因的试剂盒，采用如下的技术方案：

一种试剂盒，包括上述所述用于检测人HLA-B*8基因的检测引物组及其相应探针。

通过采用上述技术方案，本试剂盒中包括根据HLA-B*8等位基因特异性位点设计的引物组和探针，能够实现对HLA-B*8特异性位点的特异性扩增，同时探针会对HLA-B*8特异性位点进行识别并结合，进而实现对HLA-B*8等位基因的特异性检测，具有检测准确度高的优点

优选的，还包括内标引物组和内标探针。

优选的，所述内标引物组和探针是根据HLA基因上保守序列设计的。