[发明专利]一种米酵菌酸半抗原及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及半抗原技术领域，尤其涉及一种米酵菌酸半抗原及其制备方法和应用。本发明在米酵菌酸结构基础上选择分别与之两端部分结构相似的两个中间体进行改造和偶联，在特定的位点上增加丙氨基偶联臂，制得带有活性氨基的米酵菌酸半抗原，其与载体蛋白进行生物偶联后可以得到相应的米酵菌酸人工全抗原；利用该米酵菌酸人工全抗原可以制得米酵菌酸抗体，可用于快速、准确地检测出食品中的米酵菌酸。

技术领域

本发明涉及生物化工技术领域，尤其涉及一种米酵菌酸半抗原及其制备方法和应用。

背景技术

米酵菌酸(Bongkrekic Acid，BA，C₂₈H₃₈O₇)是由唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(曾用命名“酵米面假单胞菌”、“椰毒假单胞菌酵米面亚种”、“椰毒伯克霍尔德氏菌”等)产生的一种可以引起食物中毒的毒素。米酵菌酸毒性强，可引起人和多种动物的急性中毒，导致神经系统、消化系统及泌尿系统损伤，是发酵玉米面制品、变质鲜银耳及其它变质淀粉类制品引起食物中毒的主要原因。由于米酵菌酸性质稳定耐热，一般烹调方法不能破坏其毒性，而且目前并无有效的米酵菌酸快速检测试剂。

目前米酵菌酸的检测方法主要为仪器方法，这些方法准确可靠，常作为确证方法，但因设备昂贵、操作要求高、检测耗时长等原因，均难以实现实际应用中大批量样品的快速检测，而基于抗原抗体特异性结合的免疫分析技术能够满足现场快速筛查的需求。因此，研究抗米酵菌酸单克隆抗体的制备对于米酵菌酸的快速检测具有十分重要的经济和社会意义。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种米酵菌酸半抗原及其制备方法和应用，通过将半抗原与载体蛋白进行生物偶联可以得到人工全抗原，进而制备得到米酵菌酸抗体，可用于快速检测食品中的米酵菌酸。

第一方面，本发明提供一种米酵菌酸半抗原，所述米酵菌酸半抗原的化学式如式I所示：

第二方面，本发明提供一种米酵菌酸人工抗原，由所述半抗原制备得到。

进一步地，由所述米酵菌酸半抗原偶联载体蛋白得到，所述载体蛋白优选包括牛血清蛋白、钥孔血蓝蛋白、牛甲状腺球蛋白或卵清蛋白中的一种或多种。

所述米酵菌酸人工抗原结构如下，其中Carrier protein即为载体蛋白。

本发明进一步提供包括所述米酵菌酸半抗原或所述米酵菌酸人工抗原的试剂盒。

第三方面，本发明提供一种杂交瘤细胞株，通过所述的米酵菌酸人工抗原作为免疫原制备得到。

作为一种优选的具体实施方式，本发明提供一种杂交瘤细胞株的制备方法，包括：

利用所述米酵菌酸人工抗原作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，经分析测定，对免疫效果较好的小鼠收集B细胞进行细胞融合获得杂交瘤细胞，经过多轮筛选与克隆，获得效果较好的杂交瘤细胞株。

进一步地，所述米酵菌酸人工抗原所用载体蛋白为牛甲状腺球蛋白。

进一步地，所述米酵菌酸人工抗原为半抗原和载体蛋白通过活性酯法偶联得到。

进一步地，Balb/c小鼠的数量为8只。

进一步地，所述免疫Balb/c小鼠的方法如下：将所述免疫原用等体积的弗氏完全佐剂乳化后首次免疫Balb/c小鼠，再将首次免疫中所用的免疫原剂量减半，并用等体积的弗氏不完全佐剂乳化后对首次免疫的Balb/c小鼠进行加强免疫。

进一步地，所述免疫的方式为颈背部多点免疫，免疫4-8点。

进一步地，所述免疫原用PBS溶液稀释；