[发明专利]一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法，其特征在于，由如下步骤组成：

采用混合有大肠杆菌菌液的饲料饲喂空腹处理的黄粉虫幼虫，得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫；

针刺所述饲喂诱导后的黄粉虫幼虫背部节间处，得到针刺诱导后的黄粉虫幼虫；

将所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫于紫外光下照射后，培养24小时，得到含有抗菌肽的黄粉虫；

所述紫外光所使用紫外灯的功率为25W；所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫距所述紫外灯的垂直距离为25cm；所述紫外光的照射时间为30min；所述黄粉虫幼虫的龄期为7～12龄。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述针刺的次数为1～3次；

所述针刺包括直接针刺或蘸取大肠杆菌菌液针刺。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述饲料与所述大肠杆菌菌液的质量体积比为1.5～3g:1～2mL；所述大肠杆菌的浓度为0.5～1个麦氏浊度。

4.一种黄粉虫抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1～3任一项得到的所述含有抗菌肽的黄粉虫幼虫经乙酸铵提取液提取获得抗菌肽粗提液；

将所述抗菌肽粗提液经葡聚糖凝胶层析柱过滤，得到黄粉虫抗菌肽。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述含有抗菌肽的黄粉虫幼虫与所述乙酸铵提取液的质量体积比为1～2g:2.5～3mL。

6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述乙酸铵提取液包括乙酸铵缓冲液、苯甲基磺酰氟和巯基乙醇；

所述乙酸铵缓冲液的物质的量浓度为0.04～0.05mol/L，pH为5；

所述苯甲基磺酰氟的质量浓度为32～36μg/mL；

所述巯基乙醇的体积比为1.8～2‰。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述葡聚糖凝胶层析柱过滤使用的洗脱液包括乙酸铵缓冲液或生理盐水；所述洗脱液的流速为0.65～0.7mL/min；

所述葡聚糖凝胶层析柱的分离范围为1500～30000；

所述葡聚糖凝胶层析柱为Sephadex-50，所述层析柱的规格为60cm×3cm。

8.权利要求1～3任一项所述方法诱导得到的含有抗菌肽的黄粉虫幼虫或权利要求6或7所述制备方法制备得到的黄粉虫抗菌肽在制备动物抗菌饲料中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述动物包括水产动物或哺乳动物；

所述菌包括链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的一种或多种。