[发明专利]一种血源性人IgM抗体纯化介质制备方法

权利要求书

1.一种血源性人IgM抗体纯化介质制备方法，其特征在于，将一株能与人源IgM抗体μ链特异性结合的二抗AT2910通过CNBr偶联与琼脂糖介质偶联，获得IgM抗体纯化介质。

2.根据权利要求1所述的一种血源性人IgM抗体纯化介质制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、使用偶联缓冲液对AT2910蛋白进行透析置换缓冲液，按照体积比为1:40透析两次，A₂₈₀测蛋白浓度；

S2、琼脂糖CNBr冻干粉﹕AT2910＝1ml﹕4mg的比例称取相应质量的琼脂糖冻干粉，1g冻干粉对应3.5ml的成品琼脂糖凝胶柱体积；

S3、按照每g冻干粉对应20mL 1mM HCl将琼脂糖冻干粉重悬后，放置4℃活化2h；

S4、用1mM HCl将活化好的琼脂糖CNBr冲洗至少10分钟，再用去离子水冲洗将HCl完全置换，然后使用偶联缓冲液平衡；

S5、将平衡好的琼脂糖CNBr和透析好的AT2910蛋白按照所述步骤2的比例于4℃条件下在旋转混合仪上充分混合3h进行偶联；

S6、将偶联后的柱料填充到层析柱内，使用5倍柱体积的偶联缓冲液漂洗；

S7、将柱料转移到0.01M的Tris-HCl缓冲液中终止偶联反应2h；

S8、使用至少5倍柱料体积的0.1M醋酸钠或醋酸缓冲液和0.01M Tris-HCl缓冲液交替漂洗，至少循环3次；

S9、将最终获得的IgM抗体纯化介质保存在0.01M PBS，含0.02％NaN₃(w/v)中，保存于4℃。

3.根据权利要求2所述的一种血源性人IgM抗体纯化介质制备方法，其特征在于，所述偶联缓冲液包括0.1M NaHCO₃和0.3M NaCl，所述偶联缓冲液pH＝7.4。

4.根据权利要求2所述的一种血源性人IgM抗体纯化介质制备方法，其特征在于，与人源IgM抗体特异性结合的二抗AT2910的重链可变区的CDR1，CDR2，CDR3的序列如SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3所示。

5.根据权利要求4所述的一种血源性人IgM抗体纯化介质制备方法，其特征在于，与人源IgM抗体特异性结合的二抗AT2910的轻链可变区的CDR1，CDR2，CDR3的序列如SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6所示。