[发明专利]高活性高稳定性益生菌规模化制备技术开发与示范

权利要求书

1.高活性高稳定性益生菌规模化制备技术开发与示范，其特征在于，包括以下内容：

第一步：选择不同代表性的益生菌3—5株，建立发酵工艺，实现发酵液中益生菌活菌数达到100—300亿CFU/ml；

第二步：开发适用于益生菌冷冻干燥过程的保护剂并建立相关工艺，实现冷冻干燥制品中活菌数达到5000-8000亿CFU/克，常温(25度)储存12个月存活率不低于60％；

第三步：开发适用于益生菌低热喷雾干燥技术的保护剂并建立相关工艺，实现低热喷雾干燥制品中活菌数达到4000-6000亿CFU/克，常温(25度)储存12个月存活率不低于50％；

第四步：建立益生菌规模化制备示范生产线；

第五步：建立益生菌制备以及加工过程品质控制技术体系。

2.根据权利要求1所述的高活性高稳定性益生菌规模化制备技术开发与示范，其特征在于：所述高活性高稳定性益生菌规模化制备技术包括以下内容：益生菌高密度发酵培养技术；发酵完成后的菌体冷冻干燥保护剂和保护技术；低热喷雾干燥保护剂和保护技术；微胶囊保护技术；品质控制技术。

3.根据权利要求1所述的高活性高稳定性益生菌规模化制备技术开发与示范，其特征在于：所述益生菌高密度发酵培养技术包括以下内容：

第一步：高活性、高稳定性的功能益生菌株的驯化选育；

通过室温常压等离子体诱变(ARTP)与原生质体融合技术对不同功能益生菌进行“杂交”，结合底物、产物、胆盐、酸碱度等的耐受驯化，选育抗逆能力强、代谢旺盛，而且可以耐受和利用高浓度底物和自身产物的优良菌株，从源头确保功能益生菌的强势；

第二步：种子强化工艺的建立；

发酵生产的结果受制于菌种的质量、菌种过老、传代级数过多，使得菌种的高效表达及终产物的积累受阻，主要表现在难以控制有效成份的生物合成，也会造成无效成份的积累增加，进而影响发酵全过程。强化种子工艺的关键技术在于提高菌种的活力，增强菌株同步性，使其整体“年轻化”，种子强化工艺，对益生菌或活性产物的的大量积累来说非常必要；

第三步：发酵培养基及工艺优化；

根据不同益生菌的生长及代谢特性，通过单因素和多因素的组合方式考察碳源(碳源种类和碳源浓度)、氮源(氮源种类巧氮源浓度)、无机盐等对益生菌生长和代谢的影响，特别考察氨基酸(蛋氨酸和精氨酸等)和B族维生素类作为促生长因子的可能性，工艺控制方面，实行多重网络代谢控制和工艺调控，以残糖、溶氧(DO)、pH控制为主要对象，通过流加补料(主要为葡萄糖和氨水)的方式，调节功能菌株生长与代谢的关系，并逐级放大，最终实现细胞的高密度发酵与活性产物相结合。